በመከላከያ እና በክትባት መጠን መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የበሽታ ፕሪሲፒቴሽን የተለየ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ፕሮቲን ከመፍትሔው ውስጥ የሚያስገባ ቴክኒክ ሲሆን ኮይሙኖፕሲፒቴሽን ደግሞ የተለየ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ከመፍትሔው ውስጥ ያልተነኩ የፕሮቲን ውህዶችን የሚያስገባ ዘዴ ነው።
Antigen-antibody መስተጋብር በህዋሶች እና አንቲጂኖች (ፕሮቲን) በተፈጠሩ ፀረ እንግዳ አካላት መካከል የሚፈጠር ልዩ ኬሚካላዊ መስተጋብር በሽታን የመከላከል ምላሽ ጊዜ ነው። በተለምዶ የሚሟሟ አንቲጂኖች ከሚሟሟ ፀረ እንግዳ አካላት ጋር በኤሌክትሮላይት በሚሟሟ የሙቀት መጠን እና ፒኤች ሲገኙ የማይሟሟ የሚታይ ውስብስብ እንዲሆን ያደርጋሉ።ይህ የዝናብ ምላሽ ይባላል። ስለዚህ፣ የበሽታ መከላከያ እና የኮይሙኖፕሪሲፒቴሽን ሁለት አይነት የዝናብ ምላሾች በመደበኛነት በቤተ ሙከራ ውስጥ እንደ አንቲጂኖች ያሉ ፕሮቲኖችን ለመለየት ያገለግላሉ።
የበሽታ መከላከያ ምንድ ነው?
Immunoprecipitation የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ፕሮቲን ከመፍትሔው ውስጥ የማስረከቢያ ዘዴ ነው። አንዳንድ ጊዜ, ይህ ዘዴ የግለሰብ ፕሮቲን የበሽታ መከላከያ ተብሎም ይጠራል. Immunoprecipitation የተመረጠ ፕሮቲን ከሴል ሊዛት ለመለየት ፀረ እንግዳ አካላትን ይጠቀማል። ፀረ እንግዳ አካላት የተወሰነውን ፕሮቲን ወይም አንቲጅንን ከውህድ ያጸዳል። ፀረ እንግዳ አካላት ከፕሮቲን ጋር ይጣመራሉ, እና ፀረ-ሰው-አንቲጂን ስብስብ ከናሙናው ውስጥ ይወጣል. በሙከራ ቅንብር ውስጥ፣ አንቲጂን-አንቲቦይድ ውስብስቡ የሚወጣው ፕሮቲን ኤ/ጂ ጥምር አጋሮዝ ወይም ማግኔቲክ ዶቃዎችን በመጠቀም ነው። በኋላ, ዶቃዎቹ ይታጠባሉ, እና የፍላጎት ፕሮቲን ይለቀቃል. በኢንዛይም-የተገናኘ immunosorbent assay (ELISA) እና western blot (WB) ባሉ የተለያዩ ቴክኒኮች የተረጋገጠው ፕሮቲን ወይም አንቲጂን በክትባት የተገኘ ነው።
ሥዕል 01፡ የበሽታ መከላከል
ከዚህም በላይ የተገለሉ ፕሮቲኖችን ወይም አንቲጂኖችን በጅምላ ስፔክትሮሜትሪ በመጠቀም የኢንዛይም የምግብ መፈጨት ዘዴን በዋናው ቅደም ተከተል መለየት ይቻላል። የበሽታ መከላከያ ሙከራን ከመጀመራችን በፊት አንዳንድ ጉዳዮች አሉ፡ የስልት ቅርጸት ምርጫ፣ ፕሮቲኖችን እና ዶቃዎችን ማሰር፣ ትክክለኛውን ፀረ እንግዳ አካል እና አይስታይፕ መምረጥ እና አሉታዊ ቁጥጥር።
የኮይሙኖኖፕፔፕሽን ምንድን ነው?
የኮይሙኖፕሲፒቴሽን ያልተነኩ የፕሮቲን ውህዶችን የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካል በመጠቀም ከመፍትሔው ውስጥ የማስወጣት ዘዴ ነው። Coimmunoprecipitation በአጠቃላይ ትልቅ የፕሮቲን ስብስብ አባል ነው ተብሎ የሚታመነውን የታወቀ ፕሮቲን (አንቲጂን) ላይ የሚያተኩር ልዩ ፀረ እንግዳ አካላትን በመምረጥ ይሰራል።የሚታወቀውን አባል ከተወሰነ ፀረ እንግዳ አካላት ጋር በማነጣጠር ሙሉውን የፕሮቲን ስብስብ ከመፍትሔው ውስጥ ማውጣት ይቻላል. ይህ የማይታወቁ ውስብስብ አባላትን ለመለየት ያስችላል። የፕሮቲን ውስብስቦችን ከመፍትሔ የማውጣት ፅንሰ-ሀሳብ አንዳንድ ጊዜ "ወደ ታች መጎተት" ዘዴ ይባላል።
ሥዕል 02፡ B የኮሙኖኖፕፔፕሽን
የኮይሚውኖፕሲፒቴሽን የፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን የሚያገለግል ኃይለኛ ዘዴ ነው። የኮሙሞኖፕሲፒቴሽን ዋና ዓላማ እንደ ligands፣ cofactors ወይም የምልክት ሞለኪውሎች ለፍላጎት ፕሮቲን ያሉ መስተጋብር አጋሮችን መለየት ነው። ከዚህም በላይ የኮይሙኖፕራሲፒቴሽን ፕሮቲኖችን ከሴረም፣ ከሴል ሊዛት፣ ከተመሳሳይ ቲሹ ወይም ከኮንዲሽን ሚዲያ ለመለየት የሚያገለግል ውጤታማ ዘዴ ነው።
በክትባት እና በኮይሙኖኖፕሲፒቴሽን መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድን ናቸው?
- የመከላከያ ዝናብ እና የዝናብ መጠን ሁለት አይነት የዝናብ ምላሽ ላይ የተመሰረቱ ቴክኒኮች ናቸው።
- ሁለቱም ቴክኒኮች ኢላማ አንቲጂንን በአንድ የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካል ለመለየት ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ።
- ሁለቱም ቴክኒኮች በጥብቅ የተመካው በአንቲጂን-አንቲጂኖች መስተጋብር ላይ ነው።
- በመደበኛነት በክሊኒካዊ ላቦራቶሪዎች ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ።
በክትባት እና በኮይሚውኖኖፕሲፒቴሽን መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Immunoprecipitation የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ፕሮቲን ከመፍትሔው ውስጥ የሚያመነጭ ቴክኒክ ሲሆን ኮይሙኖፕሲፒቴሽን ደግሞ የተለየ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ከመፍትሔው ውስጥ ያልተነካኩ የፕሮቲን ውህዶችን የሚያፈስ ዘዴ ነው። ስለዚህ, ይህ በክትባት እና በክትባት (comimmunoprecipitation) መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው. በተጨማሪም የበሽታ መከላከያ መጠን በብዛት በላብራቶሪዎች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውል ሲሆን የኮይሙኖፕሲፒቴሽን ግን በብዛት በቤተ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ አይውልም።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በጎን ለጎን ለማነፃፀር በክትባት እና በሙቀት መጠን መጨመር መካከል ያለውን ልዩነት ያሳያል።
ማጠቃለያ - የበሽታ መከላከል እና ድንገተኛ ዝናብ
የመከላከያ ዝናብ እና የዝናብ ስርጭት በአንቲጂን-አንቲባዮድ መስተጋብር ላይ የተመሰረቱ ሁለት አይነት የዝናብ ምላሽ ላይ የተመሰረቱ ቴክኒኮች ናቸው። የበሽታ መከላከያ ዘዴው የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ፕሮቲን ከመፍትሔው ውስጥ ያመነጫል ፣ የ coimmunoprecipitation ቴክኒክ ግን ያልተነካ የፕሮቲን ውህዶች የተወሰነ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም ከመፍትሔው ያስወጣል። ስለዚህ፣ ይህ በክትባት እና በበሽታ መከላከል መካከል ያለውን ልዩነት ያጠቃልላል።
