የቁልፍ ልዩነት - ወረቀት vs ቀጭን ንብርብር vs አምድ Chromatography
የወረቀት ክሮማቶግራፊ፣ ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ እና የአምድ ክሮማቶግራፊ ሶስት ዓይነት ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ናቸው። በወረቀት ክሮማቶግራፊ ፣ በቀጭኑ ንብርብር ክሮማቶግራፊ እና በአምድ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት በ chromatography ቴክኒክ ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውለው የማይንቀሳቀስ ደረጃ ላይ የተመሠረተ ነው። የወረቀት ክሮማቶግራፊ ሴሉሎስ ወረቀትን እንደ ቋሚ ምዕራፍ ይጠቀማል፣ ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ አልሙኒያ ወይም ሲሊካ ጄል እንደ ቋሚ ምዕራፍ ይጠቀማል፣ የአምድ ክሮማቶግራፊ ግን ተስማሚ በሆነ የማትሪክስ ቁሳቁስ የታጨቀ አምድ እንደ ቋሚ ምዕራፍ ይጠቀማል።
እንደ ፕሮቲኖች እና ካርቦሃይድሬትስ ያሉ ባዮሞለኪውሎችን በመለየት እና በመለየት ሂደት ክሮማቶግራፊ ጥቅም ላይ የሚውል ጠቃሚ ባዮፊዚካል ቴክኒክ ነው። ክሮማቶግራፊ ውህዶችን በሟሟቸው፣ በመጠን እና በክፍያው ላይ በመመስረት ይለያል። የመለያየት ዘዴን መሰረት በማድረግ ክሮማቶግራፊ እንደ ion ልውውጥ፣ መምጠጥ፣ ክፍልፋይ እና መጠን ማግለል ያሉ ስልቶችን ይጠቀማል እንዲሁም ሶስት ክሮሞግራፊ ቴክኒኮች አሉ። ማለትም ወረቀት, ቀጭን ንብርብር እና አምድ ክሮማቶግራፊ. የወረቀት ክሮማቶግራፊ በጠንካራ-ፈሳሽ ማስታወቂያ እና በግቢው መሟሟት ላይ የተመሰረተ ነው, እና ሴሉሎስ ወረቀት እንደ ቋሚ ደረጃ ይጠቀማል. ቀጭን ንብርብር ክሮሞግራፊ የተመሰረተው በጠንካራ ፈሳሽ የሞለኪውሎች ማስታወቂያ ላይ ነው. በተለምዶ ከአሉሚኒየም ወይም ከሲሊካ ጄል እና ሟሟ የሆነው የሞባይል ደረጃ የተሰራ የማይንቀሳቀስ ደረጃ አለው። አምድ ክሮማቶግራፊ በማትሪክስ የታጨቀ አምድ ይጠቀማል ይህም ሞለኪውሎችን በዋናነት መጠናቸው፣ ዝምድና ወይም ክፍያው ላይ በመመስረት ነው።
የወረቀት ክሮማቶግራፊ ምንድነው?
የወረቀት ክሮማቶግራፊ በጣም ቀላሉ የክሮማቶግራፊ አይነት ሲሆን ለሰፋፊ ጥናትም አይውልም። በዋናነት በተማሪ ላቦራቶሪዎች ውስጥ እንደ አሚኖ አሲዶች እና ካርቦሃይድሬትስ በድብልቅ ውስጥ የሚገኙትን ባዮሞለኪውሎች ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል። የወረቀት ክሮማቶግራፊ በሴሉሎስ ወረቀት ወይም በ Whatman ማጣሪያ ወረቀት የተሰራ የማይንቀሳቀስ ደረጃን ይጠቀማል እና እንደ n-butanol, ወዘተ የመሳሰሉ ኦርጋኒክ መሟሟያዎችን በመጠቀም የሚዘጋጀው የሞባይል ደረጃ ብዙውን ጊዜ የሚዘጋጀው የቋሚ ደረጃው በውሃ የተሞላ ነው, ይህም የማይንቀሳቀስ ደረጃ ፈሳሽ ያደርገዋል. ስለዚህ, ውህዶች በሚታዩበት ጊዜ እና በሞባይል ደረጃው ውስጥ እንዲሰሩ ሲፈቀድ, እንደ ውህዶች መሟሟት, ይለያያሉ. ስለዚህ, የ chromatogram እድገት ላይ, የእያንዳንዱ ውህድ ርዝመት ሩጫውን ለመወሰን ማቅለም ይቻላል. የማቆያው ሁኔታ በዚህ መንገድ ሊሰላ ይችላል።
ስእል 01፡ የወረቀት ክሮማቶግራፊ
የወረቀት ክሮማቶግራፊ እንደ ወደላይ የወረቀት ክሮማቶግራፊ እና ወደ ላይ የሚወርድ የወረቀት ክሮማቶግራፊ እንደ ሩጫ መሟሟት አቅጣጫ ሊመደብ ይችላል።
ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ ምንድነው?
ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ ወይም ቲኤልሲ በድብልቅ ውስጥ የሚገኙ የተለያዩ አሚኖ አሲዶችን ለመለየት ወይም ፕሮቲኖችን ለመለየት በብዛት ጥቅም ላይ የሚውል ዘዴ ነው። የመለያየት ዘዴ በጠንካራ ፈሳሽ ማስታወቂያ ላይ የተመሰረተ ነው. በቀጭኑ ንብርብር ክሮማቶግራፊ ወቅት ከአልሙኒየም ወይም ከሲሊካ ጄል የተሰራ ሳህን እንደ ቋሚ ደረጃ ጥቅም ላይ ይውላል. የሟሟ ድብልቅ እንደየአስፈላጊነቱ ይለያያል እና ሟሟን ለማዘጋጀት የተለያዩ የኦርጋኒክ ውህዶችን እንደ n-ቡታኖል፣ አሴቲክ አሲድ እና ውሃ ሊጠቀም ይችላል። የሚለዩት ውህዶች በጠፍጣፋው ላይ ነጠብጣብ እና በሟሟ ድብልቅ ውስጥ ይጠመቃሉ. ፈሳሹ በጠፍጣፋው በተሰጠው የካፒላሪ እርምጃ ላይ ተመርኩዞ ወደ ላይ ከተጓዘ በኋላ፣ በጠፍጣፋው ላይ የተመለከቱት ውህዶች በሟሟ ውስጥ በሚሟሟቸው መጠን ላይ በመመስረት ይንቀሳቀሳሉ።
ስእል 02፡ ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ
ከክሮማቶግራም በኋላ ያሉ ቦታዎችን መለየት በተለያዩ የማቅለም ሂደቶች ይከናወናል። አንዳንዶች በትክክል መርዛማ የሆነ የማቅለም ዘዴ የሆነውን የኒኒንዲን ቀለም ይጠቀማሉ። ዘመናዊ ቀጭን ንብርብር ክሮሞግራም ከሩጫው በኋላ ክሮሞግራምን ለመመልከት የፍሎረሰንት ቴክኒኮችን ይጠቀማሉ። በተጓዘባቸው ርቀቶች ላይ በመመስረት የእያንዳንዱ ግቢ የማቆያ ጊዜ ሊሰላ ይችላል. ይህ በጥቅም ላይ በሚውለው ድብልቅ ላይ ተመስርቶ የተነጣጠለውን ድብልቅ አይነት ለመለየት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል. TLC በዋናነት በፕሮቲን ድብልቅ ውስጥ ያሉ አሚኖ አሲዶችን ለመለየት እና እንዲሁም በድብልቅ ውስጥ የሚገኙትን የተለያዩ የሞኖሳካካርዳይዶችን ለመለየት ይጠቅማል።
የአምድ Chromatography ምንድነው?
የአምድ ክሮማቶግራፊ ብዙ አይነት የክሮማቶግራፊ ቴክኒኮችን ለመግለጽ የሚያገለግል ሰፊ ቃል ሲሆን አምድ ላይ የተመሰረተ የመለያ ዘዴን ይጠቀማሉ።በአምድ ክሮሞግራፊ ውስጥ, ውህዶችን ለመለየት አካላዊ ዓምድ ከማሸጊያ ቁሳቁስ ጋር ጥቅም ላይ ይውላል. መለያየቱ በተለያዩ ውህዶች በሚታዩ አካላዊ ባህሪያት ላይ የተመሰረተ ሊሆን ይችላል. እነዚህ ንብረቶች ክፍያ፣መጠን፣ 3D ኮንፎርሜሽን እና የማሰር አቅም ወዘተ ሊሆኑ ይችላሉ።በመሆኑም በማትሪክስ የታሸገው አምድ እንደ ቋሚ ደረጃ እና በአምዱ ላይ የተተገበረው ማጠቢያ ቋት እንደ የሞባይል ደረጃ ሆኖ ያገለግላል።
ሞለኪውሎቹ በመጠን ላይ ተመስርተው የሚለያዩ ከሆነ፣የማሸጊያው እቃ የታሸገው ውህዶች እንዲሄዱባቸው ቀዳዳዎች በሚተው መንገድ ነው። ስለዚህ፣ በቀዳዳዎቹ ውስጥ ሊፈሱ የማይችሉት ትላልቅ ሞለኪውሎች በመጀመሪያ ይገለላሉ፣ ትናንሽ ሞለኪውሎች ግን ለማምለጥ ብዙ ጊዜ ይወስዳሉ።
ምስል 03፡ የአምድ Chromatography
ሞለኪውሎቹ በክፍያቸው ላይ ተመስርተው የሚለያዩ ከሆነ፣ የቋሚ ደረጃው ውህዶቹ በክፍያቸው የሚማረኩበትን አኒዮን ወይም cation exchanger ይይዛል። ስለዚህ በማጠቢያው ወቅት, ያልተጣመሩ ውህዶች ይገለላሉ. የኤሉሽን ቋት ሲጨመር፣ የታሰሩት ውህዶች ይገለላሉ። የእነዚህ ኤለመንቶች ግኝት በአብዛኛው በስፔክትሮፎቶሜትሪክ ቴክኒኮች ላይ የተመሰረተ ነው።
በወረቀት ቀጭን ንብርብር እና በአምድ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ሁሉም የወረቀት ቀጭን ንብርብር እና አምድ ክሮሞግራፊ ሶስት ቴክኒኮች እንደ አሚኖ አሲዶች፣ ፕሮቲኖች እና ካርቦሃይድሬትስ ያሉ ባዮሞለኪውሎችን ለመለየት ያገለግላሉ።
- የወረቀት ቀጫጭን ንብርብር እና የአምድ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች የሞባይል ደረጃ እና የማይንቀሳቀስ ደረጃ አላቸው።
- የወረቀት ቀጭን ንብርብር እና የአምድ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ለመለያየት ባዮፊዚካል ዘዴዎችን ይጠቀማሉ።
በወረቀት ቀጭን ንብርብር እና በአምድ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ወረቀት vs ቀጭን ንብርብር vs አምድ Chromatography |
|
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | የወረቀት ክሮማቶግራፊ በፈሳሽ-ፈሳሽ ማስታወቂያ እና በግቢው መሟሟት ላይ በመመስረት ውህዶችን ለመለየት የሚጠቅም ክሮማቶግራፊ ነው። ሴሉሎስ ወረቀት እንደ ቋሚ ደረጃው ይጠቀማል። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ ሌላው የሞለኪውሎች በጠጣር ፈሳሽ ማስታወቂያ ላይ የተመሰረተ ክሮማቶግራፊ ዘዴ ነው። ከአሉሚና ወይም ከሲሊካ ጄል የተሰራ የማይንቀሳቀስ ደረጃ እና እንደ ሞባይል ደረጃ የሚሟሟ ፈሳሽ አለው። |
| የአምድ Chromatography | የአምድ ክሮማቶግራፊ በማትሪክስ የታጨቀ አምድ ይጠቀማል ይህም ሞለኪውሎችን በዋናነት መጠናቸው፣ ቅርበት ወይም ክፍያው ላይ በመመስረት ነው። |
| ቋሚ ደረጃ | |
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | ከኒትሮሴሉሎዝ ኦፍ Whatman የተሰራ ወረቀት በወረቀት ክሮማቶግራፊ ውስጥ እንደ ቋሚ ደረጃ ጥቅም ላይ ይውላል። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | Alumina ወይም Silica gel እንደ የቀጭኑ ንብርብር ክሮማቶግራፊ ቋሚ ምዕራፍ ሆኖ ያገለግላል። |
| የአምድ Chromatography | አንድ አምድ ተስማሚ በሆነ የማሸጊያ ቁሳቁስ የታጨቀ እንደ ቋሚ ደረጃ በአምድ ክሮማቶግራፊ ጥቅም ላይ ይውላል። |
| የሞባይል ደረጃ | |
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | የሩጫ ሟሟ የወረቀት ክሮማቶግራፊ የሞባይል ደረጃ ነው። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | ሩጫ ሟሟ የቀጭኑ ንብርብር ክሮማቶግራፊ የሞባይል ምዕራፍ ነው። |
| የአምድ Chromatography | የዋሽ ቋት የአምድ ክሮማቶግራፊ የሞባይል ምዕራፍ ነው። |
| ለመለያየት የሚያገለግሉ ዘዴዎች | |
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | የወረቀት ክሮማቶግራፊ በጠንካራ ፈሳሽ መምጠጥ ላይ የተመሰረተ ነው። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | ቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ በጠንካራ-ፈሳሽ መምጠጥ ላይ የተመሰረተ ነው። |
| የአምድ Chromatography | የአምድ ክሮማቶግራፊ በመጠን ማግለል፣ ክፍያ እና ቅርፅ ላይ የተመሰረተ ነው። |
| Elution Buffer | |
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | በወረቀት ክሮማቶግራፊ አያስፈልግም። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | ለቀጭን ንብርብር ክሮማቶግራፊ አያስፈልግም። |
| የአምድ Chromatography | በአምድ ክሮማቶግራፊ ያስፈልጋል። |
| ማወቂያ | |
| የወረቀት ክሮማቶግራፊ | እድፍ ማውጣት እና የማቆየት ሁኔታን በመወሰን። |
| ቀጭን ንብርብር Chromatography | እድፍ ማውጣት እና የማቆየት ሁኔታን በመወሰን። |
| የአምድ Chromatography | Spectrophotometric ውሳኔ። |
ማጠቃለያ - የወረቀት ቀጭን ንብርብር ከአምድ Chromatography
የወረቀት ክሮማቶግራፊ፣ ቲኤልሲ እና አምድ ክሮማቶግራፊ እንደ ፕሮቲኖች፣ አሚኖ አሲዶች እና ካርቦሃይድሬትስ (በዋነኛነት monosaccharides) ያሉ ባዮሞለኪውሎችን ለመለየት የሚያገለግሉ የመለያ ዘዴዎች ናቸው።የወረቀት ክሮማቶግራፊ ሴሉሎስ ወረቀት እንደ ቋሚ ደረጃ ይጠቀማል, እና የመለያያ ዘዴው በጠንካራ ፈሳሽ ማስታወቂያ ላይ የተመሰረተ ነው. TLC በተጨማሪም ጠንካራ-ፈሳሽ ማስታወቂያ ዘዴዎችን ይጠቀማል። ሞለኪውሎቹ በተንቀሳቃሽ ደረጃ ላይ በሚሟሟቸው ላይ በመመስረት በቋሚ ደረጃ ላይ ይለያያሉ። የአምድ ክሮማቶግራፊ እንደ መጠን፣ ቅርጽ፣ ክፍያ እና የግቢውን ሞለኪውላዊ ክብደት መለያየት ያሉ አካላዊ ባህሪያትን ይጠቀማል። ከማትሪክስ ቁሳቁስ ጋር የታሸገው አምድ እንደ ቋሚ ደረጃ ሆኖ የሚያገለግል ሲሆን የማጠቢያ ቋት ግን እንደ መሟሟት ደረጃ ሆኖ ያገለግላል። ይህ በወረቀት ቀጭን ንብርብር እና በአምድ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ልዩነት ነው።
