ቁልፍ ልዩነት - ክሎኒንግ vs ንዑስ ክሎኒንግ
ክሎኒንግ እና ንዑስ ክሎኒንግ ሞለኪውላዊ ባዮሎጂካል ሂደቶች ሲሆኑ በጄኔቲክ ተመሳሳይ ሴሎችን ወይም ፍጥረታትን የሚፈጥሩ ዲ ኤን ኤ ወይም ጂን ያላቸው ፍጥረታት ናቸው። ክሎኒንግ ፍላጎት ያለው ጂን ወይም ዲ ኤን ኤ ወደ ቬክተር ማስገባት፣ በተቀባይ ባክቴሪያ ውስጥ መባዛት እና የጄኔቲክ ሜካፕ ትክክለኛ ቅጂ የሆኑ ሴሎችን ወይም ህዋሳትን ማምረትን የሚያካትት ዘዴ ነው። ንኡስ ክሎኒንግ በቬክተር ውስጥ የገባውን የፍላጎት ጂን ወደ ሁለተኛ ደረጃ ቬክተር ውስጥ ማስገባት፣ በተቀባይ ባክቴሪያ ውስጥ መባዛት እና በጄኔቲክ ተመሳሳይ የሆኑ ሴሎችን ወይም ፍጥረታትን ማምረትን የሚያካትት ዘዴ ነው።በክሎኒንግ እና በንዑስ ክሎኒንግ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት በክሎኒንግ ውስጥ የፍላጎት ጂን አንዴ ወደ ቬክተር ከተጣበቀ በኋላ የክሎኒንግ ሂደቱን ሲቀጥል በንዑስ ክሎኒንግ ውስጥ ቀድሞውኑ ክሎኒንግ የፍላጎት ጂን ከወላጅ ቬክተር ተለይቷል እና እንደገና ወደ ውስጥ ይገባል ። ተቀባይ ቬክተር እና ሂደቱን ይቀጥሉ።
ክሎኒንግ ምንድን ነው?
ክሎኒንግ በጄኔቲክ ተመሳሳይ ህዋሳትን ወይም ህዋሶችን የሚያመነጭ ሂደት ነው። በተፈጥሮ ውስጥ ፣ ክሎኒንግ በግብረ-ሥጋ ግንኙነት የመራቢያ ዘዴዎች ውስጥ ይከሰታል። የጄኔቲክ ድጋሚ ውህደት ወይም ለውጥ በማይኖርበት ጊዜ የሴት ልጅ ሴሎች የወላጅ ጄኔቲክ ሜካፕ ይቀበላሉ. ፕሮካርዮቲክ እና eukaryotic ኦርጋኒክ በሁለትዮሽ fission፣ ቡዲንግ፣ mitosis ወዘተ ክሎኖችን ይፈጥራሉ።በሞለኪውላር ባዮሎጂ፣ ክሎኒንግ ጂኖች ወይም የተወሰኑ የዲኤንኤ ቁርጥራጮች የዚያን የተወሰነ የDNA ክፍል አወቃቀር እና ተግባር ለማጥናት ታዋቂ ዘዴ ነው።
የሞለኪውላር ክሎኒንግ ዋና አላማ በሚሊዮን የሚቆጠሩ የጂን ተመሳሳይ ህዋሶችን ወይም የፍላጎት ዲኤንኤ ቁርጥራጭ (በተለይም ጂኖች) የሚይዙ ፍጥረታት ቅጂዎችን መስራት ነው።የሌላ ሰው ትክክለኛ የዘረመል ቅጂ ያላቸው ፍጥረታትን ይፈጥራል። በዋናነት የተወሰኑ ጂኖች መዋቅራዊ እና ተግባራዊ መረጃዎችን ለማግኘት እና ለዲኤንኤ ቅደም ተከተል በሞለኪውላዊ ጥናቶች ውስጥ ተዘግተዋል። እንዲሁም የተወሰኑ ፕሮቲኖችን ወይም ምርቶችን በስፋት ለማምረት ክሎኒንግ በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል።
የክሎኒንግ ሂደት
የክሎኒንግ አሰራር መሰረታዊ ደረጃዎች የሚከተሉት ናቸው።
- የፍላጎት ጂን መለየት እና ማግለል። (የፍላጎት ጂን በ PCR)።
- የፍላጎት ጂን መፈጨትን መገደብ (ገደብ ኢንዶኑክሊዝ ጂንን ይቆርጣል)።
- የቬክተር ዲኤንኤ መፈጨትን መገደብ። (ቬክተር ዲ ኤን ኤ የተቆረጠውም ተመሳሳይ ገደብ ኢንዶኑክሊዝ በመጠቀም ነው።)
- ዘረን ወደ ቬክተር ማስገባት እና የዳግም ውህዱ ሞለኪውል መፈጠር።
- የዳግም ቬክተር ወደ አስተናጋጅ ባክቴሪያ መለወጥ።
- የተለወጡ ባክቴሪያዎችን ማግለል እና መለየት (ፕላዝማይድ ቬክተር ሊመረጥ የሚችል ጂን መያዝ አለበት፣በተለምዶ የተለወጠ ባክቴሪያን ለማጣራት አንቲባዮቲክ የመቋቋም ጂን)።
- በአስተናጋጁ ውስጥ እንደገና የሚዋሃድ የጂን አገላለጽ።
ምስል_01፡ የክሎኒንግ ሂደት
Subcloning ምንድን ነው?
ንዑስ ክሎኒንግ የሚፈለገውን የጂን ተግባር ለማግኘት የጂንን አገላለጽ ከአንድ ቬክተር ወደ ሌላ ቬክተር የማንቀሳቀስ ሂደት ነው። በዚህ ዘዴ ሁለት ቬክተሮች ይሳተፋሉ; ማለትም የወላጅ ቬክተር እና መድረሻ ቬክተር. በንዑስ ክሎኒንግ ውስጥ እንደገና ወደ ሁለተኛ ቬክተር ይንቀሳቀሳሉ. ጂንን ከመጀመሪያው ቬክተር ወደ ሁለተኛው ቬክተር የማዛወር ዓላማ በመጀመሪያው ቬክተር ሊደረግ የማይችልን ነገር ለማግኘት ወይም ጂን እንደገና በዲ ኤን ኤ ክፋይ ውስጥ መለየት እና ብቻውን መግለጽ ነው። በዚህ አሰራር መጀመሪያ ላይ እገዳ ኢንዛይሞች ጥቅም ላይ ይውላሉ.
ንዑስክሎሪን ሂደት
የንዑስ ክሎሪን መሰረታዊ ደረጃዎች እንደሚከተለው ናቸው።
- በመገደብ ኢንዶኑክሊየስ በመታገዝ፣ ለጋሹ ፕላዝማይድ (የወላጅ ቬክተር) ፍላጎት ያለው ዲኤንኤ መለያየት።
- የፍላጎት ዲኤንኤ PCRን በመጠቀም ማጉላት።
- የ PCR ምርት (የፍላጎት ዲ ኤን ኤ) በጄል ኤሌክትሮፎረሲስ።
- በወላጅ ፕላዝማይድ ላይ ያለውን ፍላጎት ዲኤንኤ ለመለየት ጥቅም ላይ የሚውለው የተቀባዩ ፕላዝማይድ በተመሳሳይ ገደብ ኢንዶኑክሊየስ መክፈት።
- የፍላጎት ዲ ኤን ኤ (ጂን) ወደ ተቀባዩ ፕላዝማይድ ንዑስ ክሎድ የተደረገውን ፕላዝማይድ ለመፍጠር።
- የንዑስ ክሎድ ቬክተር ወደ ብቁ አስተናጋጅ ባክቴሪያ መለወጥ።
- የተለወጡ ሴሎችን መፈተሽ።
- የፕላዝሚድ ዲ ኤን ኤ ማጥራት እና ተፈላጊውን ምርት ለማግኘት ለዲኤንኤ ቅደም ተከተል ወይም ለጂኖች መግለጫ መጠቀም።
ንዑስ ክሎኒንግ የሚከናወነው አንዱን ጂን ከተከለሉት የጂኖች ቡድን ለመለየት ወይም የፍላጎት ጂን ወደ ጠቃሚ ፕላዝሚድ ለመሸጋገር በሚያስፈልግበት ጊዜ የፍላጎት ዘረ-መል (ጅን) ትክክለኛ ተግባር ለማየት ነው።
ምስል_02፡ ንዑስ ክሎሪን አሰራር
በክሎኒንግ እና ንዑስ ክሎኒንግ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Cloning vs Subcloning |
|
| ክሎኒንግ በጄኔቲክ ተመሳሳይ ህዋሳትን ወይም ህዋሶችን የሚያመነጭ ሂደት ነው። | ንዑስ ክሎኒንግ የሚፈለገውን የጂን ተግባር ለማግኘት የጂንን አገላለጽ ለማየት ከአንድ ቬክተር ወደ ሌላ ቬክተር የማንቀሳቀስ ሂደት ነው። |
| ሂደት | |
| የፍላጎት ዲ ኤን ኤውን ከሰውነት ለይተው አንድ ጊዜ ወደ ቬክተር ገብተው ክሎድ አድርገው | ቀድሞውንም የተከለለ ዲ ኤን ኤ ከመጀመሪያው ቬክተር ተነጥሎ ወደ ሁለተኛ ቬክተር ገብቷል እና ክሎድ። |
| እንቅስቃሴን በቬክተር አስገባ | |
| ማስገባቶችን (ዲ ኤን ኤ የፍላጎት) ከአንድ ቬክተር ወደ ሌላ ቬክተር አያንቀሳቅስ። | ከወላጅ ቬክተር ወደ መድረሻ ቬክተር አስገባ። |
ማጠቃለያ - ክሎኒንግ vs ንዑስ ክሎኒንግ
ክሎኒንግ የገባው ጂን ወይም ፍላጎት ያለው ዲ ኤን ኤ ያላቸው ዘረመል ተመሳሳይ ሴሎችን ወይም ፍጥረታትን ይፈጥራል። የፍላጎት ዲ ኤን ኤ ወደ ቬክተር በመለየት እና በማስገባቱ እና በአስተናጋጅ ባክቴሪያ ውስጥ አገላለጽ ይቀጥላል። ንዑስ ክሎኒንግ ከክሎኒንግ ጋር ተመሳሳይ ደረጃዎችን ይጋራል። ነገር ግን፣ በንዑስ ክሎኒንግ፣ ቀድሞውንም የክሎኒድ ዲ ኤን ኤ ቁራጭ (ጂን ኦፍ ወለድ) ወደ ቬክተር ገብተው ወደ አስተናጋጅ ባክቴሪያነት ይቀየራል። በክሎኒንግ እና ንዑስ ክሎኒንግ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ይህ ነው።
