በጂን ክሎኒንግ እና PCR መካከል ያለው ልዩነት

2024 ደራሲ ደራሲ: Alex Aldridge | [email protected]. ለመጨረሻ ጊዜ የተሻሻለው: 2023-12-17 13:31

ቁልፍ ልዩነት - ጂን ክሎኒንግ vs PCR

የብዙ ዲኤንኤ ቅጂዎች ከተለየ የዲኤንኤ ክፍልፋይ ውህደታቸው ዲኤንኤ ማጉያ ይባላል። ሁለት ዋና የዲኤንኤ ማጉላት ሂደቶች አሉ እነሱም ጂን ክሎኒንግ እና PCR። በጂን ክሎኒንግ እና PCR መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት፣ ጂን ክሎኒንግ በቪቮ ውስጥ የአንድን የተወሰነ ዘረ-መል (ጅን) በርካታ ቅጂዎች የሚያመነጨው እንደገና የሚዋሃድ ዲ ኤን ኤ በመሥራት እና በአስተናጋጅ ባክቴሪያ ውስጥ በማደግ ሲሆን PCR ደግሞ በሚሊዮን የሚቆጠሩ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጭ ቅጂዎችን በብልቃጥ ውስጥ በተደጋጋሚ ዑደቶች ሲያደርግ ነው። denaturation እና ውህደት።

ጂን ክሎኒንግ ምንድን ነው?

Gene ክሎኒንግ ከአንድ አካል ከተገኘው ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ውስጥ የተወሰነውን ጂን በዲኤንኤ በመገንባት ለማግኘት እና ለማባዛት የሚውል ቴክኒክ ነው።ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ለፕሮቲኖች የተቀመጡ በሺዎች የሚቆጠሩ የተለያዩ ጂኖችን ይይዛል። ዲ ኤን ኤ ሲወጣ ሊሸከሙት የሚችሉትን ጂኖች ሁሉ ያጠቃልላል። የጂን ክሎኒንግ ቴክኒክ አንድ የተወሰነ ጂን ከጠቅላላው ዲ ኤን ኤ ለመለየት አስችሏል። ስለዚህ ጂን ክሎኒንግ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ እንደ አስፈላጊ መሳሪያ ሆኖ ያገለግላል።

የሰው ልጅ ጂኖሚክ ቤተመፃህፍት መስራት በጂን ክሎኒንግ ውስጥ በዲኤንኤ ውስጥ ተዛማጅነት ያለው ጂን ያለበት ቦታ ላይ ፍንጭ ከሌለ አስፈላጊ ነው። የጂኖሚክ ቤተ-መጽሐፍት የተሰራው የሚከተሉትን ደረጃዎች በመጠቀም ነው።

ደረጃ 1፡ አጠቃላይ ዲኤንኤ ከተፈለገ የሚፈለገውን ጂን ከያዘ አካል ማውጣት።

ደረጃ 2፡ የወጣውን ዲ ኤን ኤ ትንንሽ ማስተዳደር የሚችሉ ቁርጥራጮችን ለማምረት መገደብ። ይህ እርምጃ የተሻሻለው endonucleases በመገደብ ነው።

ደረጃ 3፡ ተስማሚ የሆነ ቬክተር መምረጥ እና የቬክተር ዲ ኤን ኤውን ተመሳሳይ ገደብ ኢንዶኑክሊየስ በመጠቀም መክፈት። ባክቴሪያ ፕላዝማይድ ባዕድ ዲ ኤን ኤ ለመሸከም እንደ ቬክተር በብዛት ጥቅም ላይ ይውላል። ፕላዝሚዶች በባክቴሪያ ውስጥ የሚገኙ ትናንሽ የዲ ኤን ኤ ክበቦች ናቸው።

ደረጃ 4፡ የቬክተር ዲኤንኤ እና የተበጣጠሰ ዲኤንኤ በማጣመር የዲኤንኤ ሞለኪውልን ለማምረት። ይህ እርምጃ የሚተዳደረው በDNA ligase ነው።

ደረጃ 5፡ የዲኤንኤ ሞለኪውሎችን ወደ አስተናጋጅ ባክቴሪያዎች ማስተላለፍ። ይህ እርምጃ ትራንስፎርሜሽን በመባል ይታወቃል፣ እና የሚደረገው የሙቀት ድንጋጤ በመጠቀም ነው።

ደረጃ 5፡ የተለወጡ የባክቴሪያ ህዋሶችን በባህል ሚዲያ ላይ ማጣራት። በለውጡ ሂደት መጨረሻ ላይ የተለወጡ እና ያልተለወጡ አስተናጋጅ ሴሎች ድብልቅ ህዝብ ይገኛሉ። የፍላጎት ዘረ-መል (ጅን) የሚያጠቃልለው በተለወጡ ሆስት ሴሎች ውስጥ ብቻ ነው። ስለዚህ, የተለወጡ ሴሎችን መምረጥ አስፈላጊ ነው. ምርጫው የሚመረጠው አንቲባዮቲኮችን የያዙ ሚዲያዎችን በመጠቀም ነው። በዚህ የማጣሪያ ማእከል ላይ ምርጫውን የሚያስችለው የተለወጡ ሴሎች ብቻ ያድጋሉ።

ደረጃ 6፡ የጂን ቤተመፃህፍት ለማምረት ባክቴሪያ ማደግ። በዚህ ደረጃ፣ የተለወጡት የአስተናጋጅ ህዋሶች ጥሩ የእድገት መስፈርቶችን ወደሚያቀርቡ ትኩስ የባህል ሚዲያዎች ገብተዋል። በባህል ሰሌዳዎች ላይ ያሉ አጠቃላይ ቅኝ ግዛቶች የዚያን አካል ጂኖሚክ ቤተ-መጽሐፍትን ይወክላሉ።

ደረጃ 7፡ የፍላጎት ዘረ-መል (ጅን) የያዘው ድጋሚ የዲኤንኤ ሞለኪውል በሺህ ከሚቆጠሩ የዲ ኤን ኤ ክሎኒድ ቁርጥራጮች መፈተሽ አለበት። የተወሰነውን ጂን ወይም የተለየ የፕሮቲን ውጤቶች በሚያመላክቱ መመርመሪያዎች በመጠቀም ሊሳካ ይችላል።

የባክቴሪያውን ቅኝ ግዛት የያዘው ፍላጎት ያለው ጂን ከጠቅላላው ቅኝ ግዛቶች ከታወቀ፣ ጂን የያዘውን recombinant plasmid በሚሊዮን የሚቆጠሩ ቅጂዎችን መስራት ይቻላል።

Gene ክሎኒንግ የጂን ቤተ-መጻሕፍትን ለማቋቋም፣ ልዩ ፕሮቲን፣ ቫይታሚን፣ አንቲባዮቲክስ፣ ሆርሞኖችን በማምረት፣ የአካል ክፍሎችን በቅደም ተከተል እና በካርታ በማዘጋጀት በርካታ የግለሰቦችን ዲ ኤን ኤ በፎረንሲክስ ወዘተ. ለማምረት ያገለግላል።

ምስል_1፡ ጂን ክሎኒንግ

PCR ምንድን ነው?

Polymerase Chain Reaction (PCR) የአንድ የተወሰነ ዲኤንኤ ቁርጥራጭ ብዙ ቅጂዎችን የሚያመነጭ ዘዴ ነው። የአንድ የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ገላጭ ማጉላት በፒሲአር የተገኘ በብልቃጥ ሁኔታዎች ውስጥ ነው። ይህ ዘዴ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ በጣም ኃይለኛ መሳሪያ ነው, ምክንያቱም ትንሽ የዲ ኤን ኤ ናሙና ወደ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል. PCR በካሪ ሙሊስ በ1983 አስተዋወቀ እና ይህ ሽልማት አሸናፊ ፈጠራ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ትልቅ እድገት ፈጠረ።

PCR ቴክኒክ በስእል 02 ላይ እንደሚታየው ተደጋጋሚ PCR ምላሾችን ይከተላል። አንድ PCR ምላሽ በሦስት የተለያዩ የሙቀት መጠኖች ውስጥ የሚከሰቱ ሦስት ዋና ዋና እርምጃዎችን ያካትታል። በ94 ⁰C ላይ በዲ ኤን ኤ ላይ ድርብ ገመድ መከልከል፣ የፕሪም ማድረጊያ በ68 ⁰C እና የዝርጋታ ዝርጋታ በ72 ⁰ C ስለዚህ, PCR በሚሰራበት ጊዜ, የሙቀት መለዋወጥ ለትክክለኛው ማባዛት በከፍተኛ ሁኔታ መቆየት አለበት. PCR በ PCR ቱቦዎች ውስጥ በ PCR ማሽን ውስጥ ይከናወናል. PCR ቱቦዎች አብነት ዲኤንኤ፣ ታክ ፖሊመሬሴ፣ ፕሪመር፣ ዲኤንቲፒ እና ቋት በያዙ ትክክለኛ የ PCR ድብልቆች ተጭነዋል።ባለ ሁለት ገመድ ናሙና ዲ ኤን ኤ ወደ ነጠላ ፈትል ዲ ኤን ኤ መከልከል የሚከናወነው በተሟጋቾች መካከል ያለውን የሃይድሮጅን ትስስር በ94 – 98 ^{0C በማፍረስ ነው። ከዚያም ነጠላ የአብነት ዲ ኤን ኤ ክሮች ለፕሪመርሮች ይጋለጣሉ. ጥንድ ፕሪመር (ወደ ፊት እና ወደ ኋላ) መሰጠት አለበት, እና ከፍተኛ ሙቀትን ለመቋቋም የሙቀት መቆጣጠሪያ መሆን አለባቸው. ፕሪመርስ ነጠላ ገመድ ያላቸው አጭር የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎች ከዒላማው የዲኤንኤ ቁራጭ ጫፎች ጋር የሚደጋገፉ ናቸው። ሰው ሰራሽ ፕሪመር በ PCR ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል. ፕሪመርስ ከተጨማሪ የናሙና ዲ ኤን ኤ መሠረቶች ጋር ተያይዟል እና አዲስ ፈትል ውህደትን ይጀምራል። ይህ እርምጃ Taq polymerase ተብሎ በሚጠራው ኢንዛይም ይመነጫል; ከቴርሙስ አኩካቲከስ ተለይቶ የሚቆይ ቴርሞስታብል ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ኢንዛይም. ፕሪመርሮች እና ኑክሊዮታይዶች (የግንባታ ብሎኮች) ሲገኙ ታክ ፖሊሜሬዝ ከአብነት ዲ ኤን ኤ ጋር ተጨማሪውን የዲ ኤን ኤ አዲስ ክር ይገነባል። በ PCR ፕሮግራም መጨረሻ ላይ ጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስን በመጠቀም የተጨመረው የዲ ኤን ኤ ቁራጭ ይታያል. ተጨማሪ ትንታኔ ካስፈለገ የ PCR ምርት ከጄል ይጸዳል.}

PCR በዘረመል እና የተገኙ በሽታዎችን ለመመርመር እና ለመከታተል፣ ወንጀለኞችን ለመለየት (በፎረንሲክስ ዘርፍ)፣ የታለመ ዲኤንኤ ክፍል አወቃቀር እና ተግባርን ለማጥናት፣ የኦርጋኒክ ጂኖምዎችን ቅደም ተከተል እና ካርታ ለመስራት፣ ወዘተ ፒሲአር የተለያዩ አፕሊኬሽኖች ስላሉት በህክምና እና ሞለኪውላር ባዮሎጂ ምርምር ላቦራቶሪዎች ውስጥ በሳይንቲስቶች ዘንድ የተለመደ የላብራቶሪ ቴክኒክ ሆኗል።

ምስል_2፡ የፖሊሜሬዝ ሰንሰለት ምላሽ

በጂን ክሎኒንግ እና PCR መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?

ጂን ክሎኒንግ vs PCR
Gene ክሎኒንግ በቪቮ ውስጥ የአንድ የተወሰነ ዘረ-መል (ጅን) ብዙ ቅጂዎችን በዲ ኤን ኤ እንደገና በማዋሃድ ወደ አስተናጋጅ ባክቴሪያ የመቀየር ሂደት ነው።	የፒሲአር ቴክኒክ የ PCR ምላሾች በተደጋገሙ ዑደቶች በብልቃጥ ውስጥ የአንድ የተወሰነ የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል በርካታ ቅጂዎችን ይፈጥራል።
የዳግም ተቀናቃኝ ዲኤንኤ የመገንባት አስፈላጊነት
Recombinant DNA የተሰራው ጂንን ለማግኘት ነው።	Recombinant DNA አልተሰራም።
የሠራተኛ ፍላጎት
ይህ ሂደት ብዙ ጉልበት የሚጠይቅ ነው።	ከፍተኛ የጉልበት ሥራ አያስፈልግም።
በሕያው ወይም በብልቃጥ ሂደት
የዳግም ተቀናቃኝ ዲ ኤን ኤ መገንባት በብልቃጥ ውስጥ ሲሆን የዲ ኤን ኤ ማጉላት በቪቮ ውስጥ ነው።	የዲኤንኤ ማጉላት ሙሉ በሙሉ በብልቃጥ ውስጥ ይከሰታል።

ማጠቃለያ - ጂን ክሎኒንግ vs PCR

Gene ክሎኒንግ እና PCR ለዲኤንኤ ማጉላት ሁለት ዘዴዎች ናቸው። ፒሲአር በብልቃጥ ውስጥ የሚገኝ ሂደት ሲሆን ብዙ የዲኤንኤ ቅጂዎችን ከአንድ የተወሰነ የዲኤንኤ ክፍልፋይ የሚሰራ ዲኤንኤ እና አስተናጋጅ አካልን ሳይጠቀም። ጂን ክሎኒንግ በዋነኛነት በቪቮ ውስጥ ያለ ሂደት ነው ፣ ይህም በአስተናጋጁ አካል ውስጥ ያለው ፍላጎት ያለው ጂን በዲ ኤን ኤ በመገንባት ብዙ ቅጂዎችን ያስከትላል። ይህ በጂን ክሎኒንግ እና PCR መካከል ያለው ልዩነት ነው።