በጄል ማጣራት እና አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጄል ማጣራት ክሮማቶግራፊ በሞለኪውላዊ ክብደት ወይም በተንታኝ ናሙና መጠን ልዩነት ላይ የሚመረኮዝ ሲሆን አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ግን ተንታኝ ከማይንቀሳቀስ ሊጋንድ ጋር ባለው ዝምድና ላይ የተመሰረተ ነው።
ክሮማቶግራፊ የሚለው ቃል በትንታኔ ኬሚስትሪ ውስጥ የተለያዩ ቴክኒኮችን በመጠቀም ድብልቅ ውስጥ ያሉ ክፍሎችን የመለየት ሂደትን ያመለክታል። ክሮማቶግራፊ የተለያዩ የመለያያ ዘዴዎችን የሚወክል የጋራ ስም ነው።
የጄል ማጣሪያ Chromatography ምንድነው?
Gel filtration chromatography ማለት የንጥረ ነገሮች መለያየት በሞለኪውላዊ ክብደት ወይም መጠን ልዩነት ላይ የተመሰረተ የትንታኔ ዘዴ ነው። ይህ ዘዴ መጠነ-ማግለል ክሮማቶግራፊ ወይም ሞለኪውላር-ሲቭ ክሮሞግራፊ በመባልም ይታወቃል። በዚህ ሂደት ውስጥ ያለው መለያየት ቴክኒክ በናሙናው ውስጥ ያሉት ሞለኪውሎች ወደ ጄል-የማጣሪያ መካከለኛ ቀዳዳዎች ውስጥ ለመግባት ባላቸው ልዩነት ላይ የተመሰረተ ነው።
በጄል የማጣራት ቴክኒክ ውስጥ፣ የቋሚ ደረጃው እርጥበት ያላቸው፣ ስፖንጅ የሚመስሉ ጥቃቅን መጠኖች ያላቸው የሞለኪውላዊ ልኬቶች ቀዳዳዎች ያሉት ዶቃዎች አሉት። የተለያዩ መጠን ያላቸውን ሞለኪውሎች ያቀፈ የውሃ መፍትሄ እነዚህን “ሞለኪውላዊ ወንፊት” በያዘው አምድ ውስጥ ካሳለፍን ከማጣሪያው መካከለኛ ቀዳዳዎች የሚበልጡ ሞለኪውሎች በፍጥነት በአምዱ ውስጥ ይንቀሳቀሳሉ። በተቃራኒው ትናንሽ ሞለኪውሎች ወደ ጄል ቀዳዳዎች ውስጥ ይገባሉ እና በአምዱ ውስጥ ቀስ ብለው ይንቀሳቀሳሉ. ሞለኪውሎች በሞለኪውላዊ መጠን እንዲቀንሱ ለማድረግ ከአምዱ ይወጣሉ።እዚህ የጄል መገለል ገደብ የትንንሾቹ ሞለኪውሎች ሞለኪውላዊ ክብደት በተሰጠው ጄል ቀዳዳ ውስጥ ዘልቀው መግባት አይችሉም።
የተለያዩ አይነት ጄል የማጣራት ቴክኒኮች አሉ እነሱም በተዘዋዋሪ ጄል የማጣራት ዘዴ፣ስታራዲ ስቴት ጄል ማጣሪያ፣ጀል ዶቃ ዳያሊስስ፣ወዘተ።ቀጥታ ያልሆነ ጄል ማጣሪያ ክሮማቶግራፊ ነፃ የታይሮይድ ሆርሞኖችን ለመወሰን ይጠቅማል። Steady-state gel filtration chromatography በአብዛኛው እንደ ኮርቲሶል፣ ቴስቶስትሮን እና የመሳሰሉትን ነፃ ስቴሮይዶችን ለመለካት የሚጠቅም ቀጥተኛ ያልሆነ ቴክኒክ ነው። በሌላ በኩል የጌል ቢድ እጥበት እጥበት በአንፃራዊነት ቀላል የሆነ የስቴዲ-ስቴት ጄል ማጣሪያ ማሻሻያ ነው።
አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ምንድነው?
አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ የትንታኔ ቴክኒክ እና መለያየት ዘዴ ነው በማይንቀሳቀስ ሊጋንድ እና በተያያዙ አጋሮቹ መካከል ባለው ልዩ የግንኙነት መስተጋብር ላይ የተመሰረተ።አንዳንድ ምሳሌዎች ፀረ-ሰው-አንቲጂን ማሰሪያ፣ ኢንዛይም-ሰብስትሬት ማሰሪያ እና ኢንዛይም-አጋሽ ማሰሪያን ያካትታሉ። ስለዚህ ይህ ቴክኒክ በኒውክሊክ አሲድ የማጥራት ፣የፕሮቲን ንፅህናን ከሴል ውህዶች እና ከደም የማጥራት ብዙ ጠቃሚ አፕሊኬሽኖች አሉት።
በዚህ ቴክኒክ ውስጥ በጣም አስፈላጊው ንብረት ligand immobilization ነው። ለዚህም የተለያዩ ቁሳቁሶችን እንደ acrylates እና silica gel መጠቀም እንችላለን። የታለመው ሞለኪውል ወደ ሊጋንዳው ስቴሪካዊ ጣልቃገብነት መከላከል አስፈላጊ ነው. ከዚህም በላይ አንድ ማገጃ ከጠንካራ ደረጃ ጋር ተያይዟል. ይህንን ማገጃ ስፔሰር ብለን እንጠራዋለን። ክላሲክ፣ ስፔሰር የሃይድሮካርቦን ሰንሰለት ያካትታል።
የግንኙነት ክሮማቶግራፊ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ኮር፣ስፔሰር እና ሊጋንድ ይዟል።አንዳንድ ጊዜ ደግሞ ከሊጋንድ ጋር የተጣመረ የብረት ion አለው. በዚህ ቴክኒክ ውስጥ ለቋሚ ደረጃ በጣም የሚመረጠው ጠጣር ደረጃ አጋሮዝ ጄል ነው ምክንያቱም አምዱን በማንኛውም መጠን ያላቸውን ሙጫ አልጋዎች ለመሙላት እና ለማሸግ በቀላሉ ስለሚሰራጭ እና ባዮሞለኪውሎች በነፃነት ወደ ዶቃዎች ውስጥ እንዲገቡ በቂ ነው። ማያያዣዎቹ በተለያዩ መንገዶች ከቢድ ፖሊመር ጋር በመተባበር ሊጣበቁ ይችላሉ። በጣም የተለመዱት የስፔሰርስ ውህዶች ሳይያኖጅን ብሮማይድ፣ ኢፖክሳይድ፣ ኢፖክሳይድ ከ C6 አሲድ እና ዲያሚን ናቸው። በሌላ በኩል ልንጠቀምበት የምንችለው ሊጋንድ እንደ ዒላማው ይለያያል፡ ለምሳሌ፡ አንቲቦዲ-አንቲጅን፡ ብረት ወይም አልሙኒየም ions-phosphoproteins፡ avidin-biotin፡ glutathione-GST፡ chelator-His-tagged ፕሮቲኖች ወዘተ
በጄል ማጣሪያ እና አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Chromatography ጠቃሚ የትንታኔ ዘዴ ነው። ጄል ማጣሪያ ክሮማቶግራፊ እና አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ሁለት አስፈላጊ የክሮማቶግራፊ ልዩነቶች ናቸው። በጄል ማጣሪያ እና በአፊኒቲ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጄል ማጣሪያ ክሮማቶግራፊ በሞለኪውላዊ ክብደት ወይም በአናላይት ናሙና መጠን ልዩነት ላይ የሚመረኮዝ ሲሆን ፣ ዝምድና ክሮማቶግራፊ ግን ተንታኝ ከማይንቀሳቀስ ሊጋንድ ጋር ባለው ዝምድና ላይ የተመሠረተ ነው።
ማጠቃለያ - ጄል ማጣሪያ vs አፊኒቲ ክሮሞግራፊ
እንደ አተገባበር እና እንደ የትንታኔ ናሙና ባህሪ የተለያዩ አይነት ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች አሉ። ጄል ማጣሪያ እና አፊኒቲ ክሮሞግራፊ ሁለት ዓይነት ቴክኒኮች ናቸው። በጄል ማጣሪያ እና በአፊኒቲ ክሮማቶግራፊ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጄል ማጣራት ክሮማቶግራፊ በሞለኪውላዊ ክብደት ወይም በተንታኝ ናሙና መጠን ልዩነት ላይ የሚመረኮዝ ሲሆን አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ግን ተንታኝ ከማይንቀሳቀስ ሊጋንድ ጋር ባለው ዝምድና ላይ የተመሰረተ መሆኑ ነው።
