በኮማሴ እና በብር ቀለም መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የኮማሲ ቀለም የፕሮቲን ማቅለሚያ ዘዴ ሲሆን ኮማሲ ደማቅ ሰማያዊ ቀለም ይጠቀማል, ስሊቨር ቀለም ደግሞ የብር ቀለምን የሚጠቀም የፕሮቲን ማቅለሚያ ዘዴ ነው.
የፕሮቲን መለያየት እና መለየት በፕሮቲን ትንታኔ ውስጥ ወሳኝ እርምጃዎች ናቸው። ከጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስ በኋላ ከፍተኛ ጥራት ያለው ፕሮቲን ባህሪ ያስፈልጋቸዋል. እንደ አኒዮኒክ ማቅለሚያዎች (coomassie brilliant blue), የብረት cations (imidazole-zinc), የብር ቀለም እና የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎች, ወዘተ የመሳሰሉ የተለያዩ ቀለሞችን የሚያካትቱ በርካታ የማቅለም ዘዴዎች አሉ. አንዳንድ ጊዜ ሬዲዮአክቲቭ መመርመሪያዎችን መጠቀም ይቻላል.የማቅለም ቴክኒኩ ምርጫ የሚወሰነው በቀላልነት፣ በቤተ ሙከራ ውስጥ ያሉ የምስል መሣሪያዎች መገኘት እና የመሳሰሉት ላይ ነው።
የኮማሴ እድፍ ምንድነው?
የኮማሴ ቀለም ኮማሲ ደማቅ ሰማያዊ ቀለም የሚጠቀም የፕሮቲን ማቅለሚያ ዘዴ ነው። በአጠቃላይ ኮማሲ ሰማያዊ ቴክኒክ ይባላል። Coomassie ብሩህ ሰማያዊ በጣም ታዋቂው አኒዮኒክ ፕሮቲን-ቀለም ነው። ይህ እድፍ በመደበኛነት ሁሉንም ፕሮቲኖች ከሞላ ጎደል ጥሩ የቁጥር መስመር በመካከለኛ ትብነት ያበላሻል። Coomassie የሚያብረቀርቅ ሰማያዊ ቀለም ከሞላ ጎደል ሁሉንም ፕሮቲኖች ጋር ይያያዛል። ሁለት የተለያዩ የኮማሲ ብሩህ ሰማያዊ እድፍ ዓይነቶች አሉ፡ R-250 እና G-250። R-250 አጠር ያሉ የማቆሚያ ጊዜዎችን ያቀርባል፣ G-250 ደግሞ ይበልጥ ሚስጥራዊነት ያለው እና ለአካባቢ ተስማሚ በሆኑ ቀመሮች ይገኛል።
ሥዕል 01፡ Coomassie Staining
የኮማሴ ማቅለሚያዎች በጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ጥናቶች እና የፕሮቲን መለያ ጥናቶች በጣም ታዋቂ ናቸው። በተጨማሪም፣ ባዮ-አስተማማኝ የኮማሲ እድፍ አደገኛ ያልሆነ የኮማሴ ሰማያዊ ጂ-250 ዝግጅት ሲሆን በአሁኑ ጊዜ በገበያ ላይ ይገኛል። የዚህ አጻጻፍ ጥቅሙ ለመታጠብ እና ለማራገፍ ውሃ ብቻ ይፈልጋል. ባዮ-አስተማማኝ የኮኮማሲ እድፍ ከተለመደው ኮማሲ ሰማያዊ G-250 ጋር ተመጣጣኝ የሆነ ነገር ግን ከኮማሴይ እድፍ R-250 የተሻለ ነው። በተጨማሪም፣ ከተለመደው Coomassie ሰማያዊ G-250 የበለጠ ቀላል እና ፈጣን የማቅለም ፕሮቶኮል አለው። የኮማሲ ሰማያዊ ቀለም ጉዳቱ ከብር ቀለም ጋር ሲወዳደር ስሜታዊነቱ አነስተኛ መሆኑ ነው። Coomassie ሰማያዊ ቀለም ከብር ቀለም በ 50 እጥፍ ያነሰ ስሜታዊነት አለው። ነገር ግን በማያያዝ ቀላልነቱ ምክንያት በብዙ ጥናቶች ይመረጣል።
ሲልቨር ማቅለም ምንድነው?
የብር ቀለም የብር ቀለምን የሚጠቀም የፕሮቲን ማቅለሚያ ዘዴ ነው።የብር ቀለም ሁለቱንም agarose እና polyacrylamide gels ለማርከስ ይጠቅማል። በአጋሮዝ ጄል ውስጥ ያለው የብር ፕሮቲን በ 1973 በ Kerenyi እና Gallyas የተሰራ ነበር. በኋላ, በ SDS-PAGE ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውሉ የ polyacrylamide gels ውስጥ ለፕሮቲኖች ተስተካክሏል. በአሁኑ ጊዜ የብር ቀለም ለዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ለማቅለም ጥቅም ላይ ይውላል. ጄልሶችን ለማርከስ, በዚህ ዘዴ ውስጥ በብር ናይትሬት መፍትሄ የተከተቡ ናቸው. የብር ቀለም ፕሮቲኖች የሚገኙበትን ቦታ ከ ቡናማ ወደ ጥቁር ያበላሻል።
ምስል 02፡ ሲልቨር ማቅለም
የብር ማቅለሚያው መጠን በፕሮቲን ቀዳሚ መዋቅር ላይ የተመሰረተ ነው። ከዚህም በላይ ጥቅም ላይ የሚውሉት መርከቦች ንፅህና እና የሪኤጀንቶች ንፅህና በብር ማቅለሚያ ጥራት ላይ ተጽእኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ.ነገር ግን የብር ቀለም ጉዳቱ ሁሉንም ፕሮቲኖች በተለይም glycoproteins እና ፕሮቲኖችን ከጎን ሰንሰለታቸው ጋር የተያያዙ ትላልቅ የተሻሻሉ ቡድኖችን መለየት አለመቻሉ ነው።
በኮማሴይ እና በሲልቨር ማቅለሚያ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ኮማሴ እና የብር ቀለም ለፕሮቲን ማቅለሚያ ሁለት ቴክኒኮች ናቸው።
- ሁለቱንም ፕሮቲኖች እና ዲኤንኤ ሊበክሉ ይችላሉ።
- ሁለቱም የማቅለም ቴክኒኮች ድክመቶች አሏቸው።
- እነዚህ ቴክኒኮች እንደ መጠገን፣ ማቅለም እና ማጽዳት ያሉ ተመሳሳይ እርምጃዎች አሏቸው።
በኮማሴ እና ሲልቨር ማቅለሚያ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
የኮማሴ እድፍ የፕሮቲን ማቅለሚያ ቴክኒክ ሲሆን ኮማሲ ደማቅ ሰማያዊ ስቴንስን የሚጠቀም ሲሆን ስሊቨር ደግሞ የብር ቀለምን የሚጠቀም የፕሮቲን ማቅለሚያ ዘዴ ነው። ስለዚህ ይህ በኮማሴ እና በብር ቀለም መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። በተጨማሪም የ Coomassie ማቅለሚያ ከብር ቀለም ያነሰ ስሜትን የሚነካ ነው።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ ጎን ለጎን ለማነፃፀር በኮማሴ እና በብር ቀለም መካከል ያለውን ልዩነት ይዘረዝራል።
ማጠቃለያ - Coomassie vs Silver Staining
ፕሮቲኖችን በዓይነ ሕሊና ለማየት፣ ፕሮቲን-ተኮር ቀለም-ማሰር ወይም ቀለም የሚያመነጭ ኬሚካላዊ ምላሽ ሊከናወን ይችላል። ይህ የፕሮቲን ቀለም ይባላል. የ Coomassie እና የብር ቀለም በፕሮቲን ማቅለሚያ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁለት ዘዴዎች ናቸው. Coomassie የማቅለም ቴክኒክ ኮማሲ የሚያብረቀርቅ ሰማያዊ ቀለምን ሲጠቀም ስሊቨር ቀለም ደግሞ የብር እድፍ ይጠቀማል። ስለዚህ፣ በኮማሴ እና በብር ቀለም መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ይህ ነው።
