በጂኤፍፒ እና EGFP መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጂኤፍፒ በአጥቢ እንስሳት ሴሎች ሞለኪውላዊ ክሎኒንግ ውስጥ የተካተተ የዱር አይነት ፕሮቲን ሲሆን EGFP ደግሞ የተሻሻለ ወይም ምህንድስና የተፈጠረ የጂኤፍፒ አይነት ሲሆን በአጥቢ እንስሳት ላይ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.
ሞለኪውላር ክሎኒንግ ሳይንቲስቶች ፕሮቲኖችን በሪኮምቢንንት ቴክኖሎጂ ለመግለጥ የሚጠቀሙበት የላቀ ቴክኒክ ነው። በእንደገና ዲ ኤን ኤ ቴክኖሎጂ ውስጥ, እንደገና የተዋሃደውን ቬክተር በተሳካ ሁኔታ ወደ ፍጥረተ አካል መቀየር አስፈላጊ ነው. ስለሆነም በለውጡ ሂደት ውስጥ የፍላጎት ዘረ-መል (ጅን) ወደ አስተናጋጅነት መቀየሩንና አለመቀየሩን መለየት እና መረጋገጥ አለበት። ይህንን ለመገምገም ሞለኪውላር ባዮሎጂስቶች ብዙ ዘዴዎችን ይጠቀማሉ.ከነዚህ ቴክኒኮች አንዱ የሪፖርተር ጂን ነው። እነዚህ ዘጋቢ ጂኖች ትክክለኛ ትራንስፎርመሮችን ለመምረጥ እንደ ተመረጡ ጠቋሚዎች ይሠራሉ. ስለዚህ አረንጓዴ ፍሎረሰንት ፕሮቲን (ጂኤፍፒ) እና የተሻሻለ አረንጓዴ ፍሎረሰንት ፕሮቲን (EGFP) በሞለኪውላር ክሎኒንግ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁለት ዘጋቢ ፕሮቲኖች ናቸው።
ጂኤፍፒ ምንድን ነው?
ጂኤፍፒ ከሌሎቹ የፍሎረሰንት ፕሮቲኖች የሚለዩ 238 የአሚኖ አሲድ ቅሪቶችን እና በርካታ የተመረጡ የአሚኖ አሲድ ቅደም ተከተሎችን የያዘ የዱር አይነት ፕሮቲን ነው። ከዚህም በላይ ይህ የዱር ፕሮቲን በመጀመሪያ ከኤኮሪያ ቪክቶሪያ ተለይቷል; የጄሊፊሽ ዓይነት. ነገር ግን፣ በተፈጥሮ ክስተቶች፣ ጄሊፊሽ ለተወሰኑ ማነቃቂያዎች ምላሽ ለመስጠት አረንጓዴ ቀለም ፍሎረሰንት ማምረት ችሏል።
ከዚህ ቀደም ይህ ጽንሰ-ሀሳብ ሳይንቲስቶችን አስገርሟቸዋል፣ እና እንደገና በሚዋሃዱ የዲኤንኤ ቴክኖሎጂዎቻቸው ላይ ለመጠቀም ወሰኑ። ስለሆነም ሳይንቲስቶች በጂን አገላለጽ ጥናታቸው ይህን የዱር-አይነት ጂን እንደ ዘጋቢ ጂን ተጠቅመውበታል። የዱር-አይነት የጂኤፍፒ ጂን በክፍል ሙቀት ወይም በ UV ብርሃን ውስጥ ፍሎረሰንት የሚሰጥ ፕሮቲን ማምረት ይችላል።ስለዚህ, ወደ ትራንስፎርማቶች ሲገባ, ይገለጻል እና ፍሎረሰንት ይፈጥራል. ፍሎረሰንስ ከለውጡ ሂደት በኋላ ውጤቱን ካገኘ, የለውጥ ሂደቱን ስኬታማነት ያረጋግጣል. በቀላል አነጋገር፣ የፍሎረሰንት ልቀት የፍላጎትን ጂን ወደ አስተናጋጁ የሚያስገባው የቬክተር ስኬታማ ለውጥ ያሳያል።
ምስል 01፡ GFP
በዚህ ምክንያት ጂኤፍፒ እንደ የጂን አገላለጽ በቫይቮ ምልክት ሆኖ ይሰራል። በአሁኑ ጊዜ ጂኤፍፒን ለማምረት የጄኔቲክ ምህንድስና ዘዴዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ. እንዲሁም፣ እንደ EGFP ያሉ ብዙ የተሻሻሉ የጂኤፍፒ ስሪቶች አሉ። ስለዚህ ይህ ጂኤፍፒን በሞለኪውላር ክሎኒንግ እና በጂን አገላለጽ ጥናቶች ላይ በብቃት መጠቀም ያስችላል።
ኢጂኤፍፒ ምንድን ነው?
የተሻሻለ አረንጓዴ ፍሎረሰንት ፕሮቲን ወይም EGFP የተሻሻለ የጂኤፍፒ ስሪት ነው።በቀላል አነጋገር፣ EGFPን እንደ ኢንጂነሪንግ የዱር-አይነት ጂኤፍፒ መግለፅ እንችላለን። የዱር-አይነት የጂኤፍፒ ጂን በሚቀየርበት ጊዜ ጠቃሚ ውጤቶችን ያስገኛል. ስለዚህ፣ የጂኤፍፒ ሚውቴሽን ጂን አዳዲስ ገጸ-ባህሪያትን ለመግለጽ ያስችላል፣ እናም በዚህ ምክንያት፣ የተሻሻሉ ባህሪያትን የያዘ የተሻሻለ ጂኤፍፒን መፍጠር እንችላለን። በተጨማሪም የኢራዲሽን ወይም ኬሚካላዊ ዘዴዎችን በመጠቀም በዱር-አይነት ጂኤፍፒ ጂን ላይ ሚውቴሽን በተሳካ ሁኔታ ማስተዋወቅ እንችላለን። እነዚህ የተቀየሩ ጂኖች የበለጠ ጠቃሚ ባህሪያት ያለውን EGFP ያመነጫሉ።
ምስል 02፡ EGFP
የተሻሻሉ የEGFP ባህሪያት የሚከተሉት ናቸው፤
- ጠንካራ የፍሎረሰንት ምልክቶችን መልቀቅ ይችላል።
- ከፍተኛ ትብነት አለው።
- ከፕሮካርዮት እና ከሌሎች ዝቅተኛ ደረጃ eukaryotes ይልቅ በአጥቢ አጥቢ ህዋሶች ላይ ሊጠቀምበት ይችላል።
- እንዲሁም የምርቱን ንፅህና ይጨምራል።
ስለዚህ ከጂኤፍፒ ጋር ሲወዳደር EGFP ለጂን አገላለጽ ጥናት ተመራጭ ነው። ነገር ግን ምርቱ ከጂኤፍፒ ጋር ሲወዳደር በጣም ውድ ነው።
በጂኤፍፒ እና በEGFP መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድን ናቸው?
- ጂኤፍፒ እና ኢጂኤፍፒ አረንጓዴ ቀለም የማስለቀቅ ችሎታ ያላቸው ሁለት ፕሮቲኖች ናቸው
- ስለዚህ ሁለቱም በጂን አገላለጽ ጥናቶች እንደ ዘጋቢ ፕሮቲኖች ይሠራሉ።
- እንዲሁም የዲኤንኤ ቴክኖሎጂን በመጠቀም ሁለቱንም ማዋሃድ ይቻላል።
- በተጨማሪም፣ የተሻሻሉ ቅጾችን ለማዋሃድ እነዚህን ሁለት ዓይነቶች የበለጠ መቀየር ቀላል ነው።
በጂኤፍፒ እና EGFP መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
የዘጋቢው ዘረ-መል (ጅን) የፍላጎት ጂን ከዲኤንኤ ቴክኖሎጂ ጋር የተያያዘ ነው። የእንደገና ቬክተር ወደ አስተናጋጁ በተሳካ ሁኔታ መለወጥን ያመለክታል.እዚህ GFP እና EGFP እንደ ዘጋቢ ፕሮቲኖች የሚሰሩ ሁለት አይነት አረንጓዴ የፍሎረሰንት ፕሮቲኖች ናቸው። ይሁን እንጂ በጂኤፍፒ እና በ EGFP መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጂኤፍፒ የዱር አይነት ሲሆን EGFP ደግሞ የምህንድስና የጂኤፍፒ ስሪት ነው። በተጨማሪም EGFP ከጂኤፍፒ የበለጠ ጠቃሚ ባህሪያት አሉት. ለምሳሌ፣ EGFP የበለጠ ጠንካራ የፍሎረሰንት ብርሃን ይፈጥራል እና ከጂኤፍፒ የበለጠ ስሜታዊ ነው። በጂኤፍፒ እና በ EGFP መካከል ያለው ሌላው ልዩነት እነዚህን ልንጠቀምባቸው የምንችላቸው ስርዓቶች ነው። አጥቢ ያልሆኑ ስርዓቶች ጂኤፍፒን ሲጠቀሙ አጥቢ እንስሳት ስርዓቶች EGFPን ይጠቀማሉ።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በጂኤፍፒ እና በEGFP መካከል ያለውን ልዩነት በሰንጠረዥ መልኩ ያቀርባል።
ማጠቃለያ - ጂኤፍፒ vs EGFP
GFP እና EGFP በሞለኪውላር ክሎኒንግ እና በጂን አገላለጽ ጥናቶች ውስጥ ዘጋቢ ፕሮቲኖች ናቸው። ጂኤፍፒ የዱር-አይነት ፕሮቲን ነው, እሱም አረንጓዴ የፍሎረሰንት ፕሮቲን ነው.ፕሮቲኑ መጀመሪያ ላይ ከጄሊፊሽ Aequorea victoria ተነጥሎ ነበር። በተቃራኒው፣ EFGP የተሻሻለ የጂኤፍፒ ፕሮቲን ነው። የተሻሻሉ ባህሪያት ያለው የዱር-አይነት ሚውቴሽን ነው. ስለዚህ, EFGP ከፍተኛ የሲግናል ጥንካሬ እና ከፍተኛ ትብነት አለው. ስለዚህ, በአጥቢ እንስሳት ላይ ልንጠቀምበት እንችላለን. በተቃራኒው የጂኤፍፒ አጠቃቀም በዋናነት በአጥቢ እንስሳት ላይ ብቻ ነው. በአጠቃላይ ይህ በጂኤፍፒ እና በEGFP መካከል ያለው ልዩነት ነው።
