ቁልፍ ልዩነት - ሰሜናዊ ከደቡብ vs ምዕራባዊ መጥፋት
የዲኤንኤ፣ አር ኤን ኤ እና ፕሮቲኖች የተወሰኑ ቅደም ተከተሎችን መለየት በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ለተለያዩ የጥናት ዓይነቶች አስፈላጊ ነው። ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ዲ ኤን ኤ ፣ አር ኤን ኤ እና ፕሮቲኖችን እንደ መጠናቸው የሚለይ ዘዴ ነው። ከጄል መገለጫዎች፣ የተለየ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል፣ የአር ኤን ኤ ቅደም ተከተል፣ ወይም ፕሮቲን በልዩ ቴክኒኮች መጥፋት እና ማዳቀል በተሰየሙ መፈተሻዎች ተገኝተዋል። ሶስት ዓይነት የመጥፋት ዘዴዎች አሉ-ደቡብ ፣ ሰሜናዊ እና ምዕራባዊ ። በሰሜናዊ ደቡባዊ እና ምዕራባዊ መጥፋት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ከናሙና በሚያገኘው የሞለኪውል ዓይነት ነው።ደቡባዊ መጥፋት ከዲኤንኤ ናሙና የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተልን የሚያውቅ ዘዴ ነው። ሰሜናዊ መጥፋት ከአር ኤን ኤ ናሙና የተወሰነ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተልን የሚያውቅ ዘዴ ነው። የምዕራቡ መጥፋት የተወሰነ ፕሮቲን ከፕሮቲን ናሙና የሚለይ ዘዴ ነው።
የደቡብ ብሎቲንግ ምንድን ነው?
የደቡብ ብሉቲንግ ቴክኒክ በE. M. Southern በ1975 ከዲኤንኤ ናሙና የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተልን ለመለየት ተዘጋጅቷል። ይህ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ የገባው የመጀመሪያው የመጥፋት ዘዴ ነው። የተወሰኑ ጂኖችን ከዲኤንኤ፣ ከዲኤንኤ የተወሰኑ ቁርጥራጮችን፣ ወዘተ ለመለየት አስችሏል።በደቡብ የመጥፋት ቴክኒክ ውስጥ በርካታ ደረጃዎች አሉ። እነሱም እንደሚከተለው ናቸው።
- ዲኤንኤ ከናሙናው ተነጥሎ በተከለከሉ ኢንዶኑክሊየስ የተፈጨ ነው።
- የተፈጨ ናሙና በአጋሮሴ ጄል ኤሌክትሮፊዮርስስ ይለያል።
- በጄል ውስጥ ያሉ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች የአልካላይን መፍትሄ በመጠቀም ወደ ነጠላ ክሮች ይጣላሉ።
- ነጠላ የተሳሰረ ዲ ኤን ኤ ወደ ናይትሮሴሉሎስ ማጣሪያ ሽፋን በካፒላሪ በማስተላለፍ ይተላለፋል።
- የተላለፈ ዲኤንኤ በቋሚነት በገለባው ላይ ተስተካክሏል።
- ቋሚ ዲ ኤን ኤ በገለባው ላይ በተሰየሙ መመርመሪያዎች ተደባልቋል።
- ያልታሰረ ዲኤንኤ ከገለባው በመታጠብ ይታጠባል።
- የኤክስ ሬይ ፊልም ለገለባ ተጋልጦ አውቶራዲዮግራፍ ተዘጋጅቷል።
የደቡብ ነጠብጣብ ለተለያዩ የሞለኪውላር ባዮሎጂ ገጽታዎች ይተገበራል። በ RFLP ካርታ ስራ፣ በፎረንሲክ ጥናቶች፣ በጂን አገላለጽ ውስጥ በዲኤንኤ ሜቲላይሽን፣ በጄኔቲክ እክሎች ውስጥ ያሉ ሚውቴሽን ጂኖችን መለየት፣ ዲኤንኤ የጣት አሻራ፣ ወዘተ ላይ ጠቃሚ ነው።
ሥዕል 01፡ ደቡባዊ የብሎቲንግ ቴክኒክ
የሰሜን መጥፋት ምንድነው?
የሰሜናዊ ደም መፋሰስ የጂን አገላለፅን ለማጥናት ከናሙና የተወሰነ የአር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ወይም ኤምአርኤን ቅደም ተከተል ለማወቅ የተነደፈ ዘዴ ነው። ይህ ዘዴ በ 1979 በአልዊን, ኬምፕ እና ስታርክ የተሰራ ነው. በበርካታ ደረጃዎች ምክንያት ከደቡብ እና ከምዕራባዊው የመጥፋት ዘዴዎች ይለያል. ይሁን እንጂ ይህ ዘዴ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ፣ በብሎቲንግ እና በማዳቀል በልዩ ምልክት በተሰየሙ መመርመሪያዎች እና በመለየት ይከናወናል። ሰሜናዊ የመጥፋት ቴክኒክ እንደሚከተለው ይከናወናል።
- አር ኤን ኤ ከናሙናው ወጥቶ በጄል ኤሌክትሮፊዮርስስ ተለይቷል።
- አር ኤን ኤ ከጄል ወደ መጥፋት ሽፋን ይተላለፋል እና ተስተካክሏል።
- የገለባው ሽፋን ከሲዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ በተዘጋጀ ምልክት በተሰየመ መመርመሪያ ይታከማል (መመርመሪያው በናሙናው ውስጥ ካለው የተወሰነ ቅደም ተከተል ጋር የሚጣመር ነው።)
- መመርመሪያው ከተወሰነ ቅደም ተከተል ጋር ለማያያዝ ከገለባው ጋር የተቀላቀለ ነው።
- የማይታሰሩ መመርመሪያዎች ታጥበዋል::
- የተዳቀሉ ቁርጥራጮች በአውቶራዲዮግራፍ ተገኝተዋል።
የሰሜናዊ ደም መፋሰስ የተዳቀለ ኤምአርኤን ለማወቅ እና ለመለካት፣አር ኤን ኤ መበላሸትን ለማጥናት፣የአር ኤን ኤ የግማሽ ህይወት ግምገማ፣አር ኤን ኤ ስንጥቅ መለየት፣የጂን አገላለፅን ለማጥናት ወዘተ ጠቃሚ መሳሪያ ነው።
ምስል 02፡ ሰሜናዊ መጥፋት
የምእራብ ብሉቲንግ ምንድን ነው?
የምዕራባውያን ደም መፋሰስ አንድን የተወሰነ ፕሮቲን ከፕሮቲን ድብልቅ ውስጥ መለያ ምልክት የተደረገበት ፀረ እንግዳ አካላትን የመለየት ዘዴ ነው። ስለዚህ, የምዕራባዊው ነጠብጣብ (immunoblot) በመባልም ይታወቃል. ይህ ዘዴ በ Towbin et al በ 1979 አስተዋወቀ እና አሁን በመደበኛነት በቤተ ሙከራ ውስጥ ለፕሮቲን ትንተና ይከናወናል. እርምጃዎች እንደሚከተለው ናቸው።
- ፕሮቲኖች ከናሙና ይወጣሉ።
- ፕሮቲኖች ፖሊacrylamide gel electrophoresisን በመጠቀም በመጠናቸው ይለያያሉ
- የተለያዩ ሞለኪውሎች ወደ PVDF membrane ወይም nitrocellulose membrane በኤሌክትሮፖሬሽን ይተላለፋሉ።
- የገለባው ሽፋን ከፀረ እንግዳ አካላት ጋር ለየት ያለ ትስስር ታግዷል
- የሚተላለፉ ፕሮቲኖች ከዋና ፀረ እንግዳ አካላት (ኢንዛይም ምልክት የተደረገባቸው ፀረ እንግዳ አካላት) ጋር የተሳሰሩ ናቸው።
- የገለባው ሽፋን ታጥቦ ልዩ ያልሆኑ ቀዳሚ ፀረ እንግዳ አካላትን ለማስወገድ
- የታሰሩ ፀረ እንግዳ አካላት የሚታወቁት substrate በመጨመር እና የተፈጠረውን ባለቀለም ዝናብ በመለየት
የምዕራባውያን ደም መፋሰስ በሰው ደም ናሙና ውስጥ ፀረ ኤችአይቪ ፀረ እንግዳ አካላትን ለመለየት ጠቃሚ ነው። ዌስተርን ብሎት ለሄፕታይተስ ቢ ኢንፌክሽን እንደ ማረጋገጫ እና ለእብድ ላም በሽታ ትክክለኛ ምርመራ ሊያገለግል ይችላል።
ሥዕል 03፡ ምዕራባዊ መጥፋት
በሰሜን ደቡባዊ እና ምዕራባዊ ብሎቲንግ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ሰሜን ከደቡብ vs ዌስተርን ብሎቲንግ |
|
| የሞለኪውል አይነት ተገኝቷል | |
| ሰሜናዊ መጥፋት | የሰሜናዊ መጥፋት የተወሰነ አር ኤን ኤ ተከታታይ ከአር ኤን ኤ ናሙና ያገኛል። |
| የደቡብ መጥፋት | የደቡብ መጥፋት የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ከዲኤንኤ ናሙና ያገኛል። |
| የምዕራባዊ መጥፋት | የምዕራባውያን መጥፋት የተወሰነ ፕሮቲን ከፕሮቲን ናሙና ያገኛል። |
| የጌል አይነት | |
| ሰሜናዊ መጥፋት | ይህ አጋሮሴ/ፎርማልዴይዴ ጄል ይጠቀማል። |
| የደቡብ መጥፋት | ይህ አጋሮሴ ጄል ይጠቀማል። |
| የምዕራባዊ መጥፋት | ይህ ፖሊacrylamide gelን ይጠቀማል። |
| የማጥፋት ዘዴ | |
| ሰሜናዊ መጥፋት | ይህ የካፊላሪ ዝውውር ነው። |
| የደቡብ መጥፋት | ይህ የካፊላሪ ዝውውር ነው። |
| የምዕራባዊ መጥፋት | ይህ የኤሌክትሪክ ማስተላለፊያ ነው። |
| መመርመሪያዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ | |
| ሰሜናዊ መጥፋት | cDNA ወይም አር ኤን ኤ መመርመሪያዎች በራዲዮአክቲቭ ወይም በራዲዮአክቲቭ ምልክት ተለጥፈዋል። |
| የደቡብ መጥፋት | የዲ ኤን ኤ መመርመሪያዎች በራዲዮአክቲቭ ወይም በራዲዮአክቲቭ ያልሆነ ምልክት ተደርጎባቸዋል። |
| የምዕራባዊ መጥፋት | ዋና ፀረ እንግዳ አካላት እንደ መመርመሪያ ጥቅም ላይ ይውላሉ። |
| የመፈለጊያ ስርዓት | |
| ሰሜናዊ መጥፋት | ይህ የሚደረገው በራዲዮግራፍ ወይም የብርሃን ወይም የቀለም ለውጥን በመጠቀም ነው። |
| የደቡብ መጥፋት | ይህ የሚደረገው በራዲዮግራፍ፣ የብርሃን ወይም የቀለም ለውጥን በመጠቀም ነው። |
| የምዕራባዊ መጥፋት | ይህ የሚደረገው የብርሃን ወይም የቀለም ለውጥን በማወቅ ነው። |
ማጠቃለያ - ሰሜናዊ vs ደቡባዊ vs ምዕራባዊ መጥፋት
Bloting የተለየ ዲ ኤን ኤ፣ አር ኤን ኤ ወይም ፕሮቲን ከናሙናዎቹ ለመለየት የተሰራ ልዩ ቴክኒክ ነው።አንድ የተወሰነ የሞለኪውል ዓይነት ለመለየት ሦስት የተለያዩ የመጥፋት ሂደቶች አሉ-ሰሜን ፣ ደቡብ እና ምዕራባዊ። ሰሜናዊ የመጥፋት ቴክኒክ የተነደፈው ከአር ኤን ኤ ድብልቅ የተወሰነ የአር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ነው። የደቡባዊ የብሎቲንግ ቴክኒክ ከዲኤንኤ ናሙና የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል እንዲገኝ ያስችለዋል እና የምእራብ ብሉቲንግ ቴክኒክ ከፕሮቲን ድብልቅ የተወሰነ ፕሮቲን ለመለየት ይዘጋጃል።
