PCR vs Real-time PCR
PCR ወይም Polymerase chain reaction በዘመናዊ ሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ አብዮታዊ ግኝት ነው፣ይህም በኬሚስት ካሪ ሙሊስ በ1983 ዓ. የ PCR መሰረታዊ ሃሳብ ከዲኤንኤ ተከታታይ ተቃራኒ ክሮች ጋር የሚደጋገፉ ሁለት ፕሪመርሮች እርስ በእርሳቸው ያተኮሩ ናቸው; ፕሪመርዎቹ ተጨማሪ ክሮች ያመርታሉ, እያንዳንዳቸው ሌላውን ፕሪመር ይይዛሉ. ስለዚህም ውጤቱ በሁለቱ ፕሪመርሮች መካከል ካለው ዲኤንኤ ጋር የሚዛመድ ከፍተኛ መጠን ያለው ቅደም ተከተል ነው። የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜን ኢንዛይም በ PCR ውስጥ ያሉትን ፕሪመርሮች ለማራዘም ይጠቅማል.ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ቴርሞስታብል ኤንዛይም ሲሆን በከፍተኛ ሙቀት (94 እስከ 95 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) የአብነት ዲኤንኤ ዲኤንኤ ዲናቱረሽን ጥቅም ላይ የሚውልበት አቅም አለው።
PCR ሶስት እርከኖችን ያካትታል እነሱም ተደጋጋሚ የ denaturation ዙሮች፣ ፕሪመርሮችን መሰረዝ እና የዲኤንኤ ውህደት። የሙቀት መጠኑን በፍጥነት እና በትክክል ለመለወጥ ፕሮግራም እንዲዘጋጅ ቴርሞሳይክል ማሽን ይህንን ምላሽ ለማከናወን ይጠቅማል። የ PCR አፕሊኬሽኖች የወንጀል ምርመራዎች፣ የዲኤንኤ አሻራ፣ በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን መለየት እና የጥንት የሰው ልጅ ዝርያዎችን ዲኤንኤ ትንተና ናቸው።
የተለመደ PCR ምንድን ነው?
የተለመደ PCR ሶስት ዋና ዋና ደረጃዎች አሉ እነሱም; የዲኤንኤ ማጉላት ደረጃ, PCR መለየት እና ምርቶችን መለየት. የዲኤንኤ ክፍሎችን መለየት በተለምዶ በአጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ይከናወናል. ከዚያም ምርቶቹ በ etheiduim bromide ተበክለዋል. በመጨረሻም፣ በUV መብራት ስር ያሉ ባንዶች ላይ ጂልስ ላይ በእይታ በማየት ማግኘት ይቻላል። ስለዚህ, የተለመደው PCR የመጨረሻ ውጤቶች እንደ ቁጥሮች አልተገለጹም.በተለምዶ የተለመደው PCR አንድ ግቤት ብቻ ነው ማወቅ የሚችለው።
የእውነተኛ ጊዜ PCR ምንድነው?
በእውነተኛ ጊዜ PCR ምርቶቹ የተዋሃዱ በመሆናቸው የምርቶችን ማጉላት ማወቅ ይችላል። በቴክኖሎጂ እድገት PCR በተለይም በምግብ ውስጥ ባክቴሪያዎችን ለይቶ ለማወቅ እና ለመለየት በጣም ተወዳጅ ዘዴ ሆኗል. የእውነተኛ ጊዜ PCR የፍሎረሰንት ማቅለሚያ ስርዓት እና ቴርሞሳይክል በፍሎረሰንት የመለየት ችሎታን ይጠቀማል።
በመደበኛ PCR እና Real-time PCR መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
• ተለምዷዊ PCR የተሻሻለ PCR ምርቶችን ለመተንተን ጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስን ስለሚጠቀም የበለጠ ጊዜ የሚወስድ ነው። በአንጻሩ፣ የእውነተኛ ጊዜ PCR በምላሹ የመጀመሪያ ደረጃዎች ላይ ማጉላትን ስለሚያውቅ ብዙ ጊዜ የሚወስድ ነው።
• የእውነተኛ ጊዜ PCR መረጃን በ PCR ጉልህ የእድገት ደረጃ ይሰበስባል፣ ባህላዊ PCR ደግሞ በምላሹ የመጨረሻ ነጥብ ላይ መረጃን ይሰበስባል።
• የመደበኛው PCR የመጨረሻ ነጥብ ውጤቶች በጣም ትክክል ላይሆኑ ይችላሉ፣ነገር ግን የእውነተኛ ጊዜ PCR ውጤቶች በጣም ትክክለኛ ናቸው።
• የእውነተኛ ጊዜ PCR ከተለመደው PCR የበለጠ ስሜታዊ ነው።
• ተለምዷዊ PCR በጣም ደካማ ጥራት ያለው ሲሆን ቅጽበታዊ PCR በከፍተኛ ጥራት ምክንያት በጣም ትንሽ ለውጦችን ሊያገኝ ይችላል።
• የመደበኛ PCR የመጨረሻ ነጥብ ማወቂያ አጭር ተለዋዋጭ ክልል ሲኖረው የእውነተኛ ጊዜ PCR ማወቂያ ሰፊ ተለዋዋጭ ክልል አለው።
• ከመደበኛው PCR በተለየ፣ አውቶማቲክ የመለየት ዘዴዎች በእውነተኛ ጊዜ PCR ውስጥ ይገኛሉ።
• ተለምዷዊ PCR በጣም የተራቀቀ እና ከእውነተኛ ጊዜ PCR የበለጠ ጉልበት የሚጠይቅ ነው።
• ከእውነተኛ ጊዜ PCR በተለየ፣ የተለመደው PCR በሞቱ እና በህይወት ባሉ ባክቴሪያዎች መካከል ልዩነት መፍጠር አይችልም።
• የእውነተኛ ጊዜ PCR ምርቶቹን ለመለየት የፍሎረሰንት ማቅለሚያ ሲስተሙን ሲጠቀም የተለመደው PCR ደግሞ ኤቲዲየም ብሮሚድ እና ዩቪ መብራትን በአጋሮዝ ጄል መካከለኛ ክፍል ውስጥ ባንዶችን በምስል ያሳያል።
