በእርሾ አንድ ዲቃላ እና ሁለት እርሾ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት እርሾ አንድ ዲቃላ የዲኤንኤ እና ፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን በብልቃጥ ላይ የተመሰረተ ትንታኔ ሲሆን እርሾ ሁለት ድብልቅ የፕሮቲን-ፕሮቲን ግንኙነቶችን ለመተንተን በቪትሮ ላይ የተመሰረተ ትንታኔ ነው።
በሴሉላር ሞለኪውሎች መካከል ያለውን መስተጋብር ማጥናት በጂን አገላለጽ እና በፕሮቲን መንገዶች ውስጥ የተካተቱ እውቅና ጣቢያዎችን ለመለየት ይረዳል። የዲኤንኤ እና የፕሮቲን መስተጋብር ከሴሉላር ሂደቶች እንደ ዲኤንኤ ማሻሻያ እና ግልባጭ ደንብ ወዘተ.በሌላ በኩል የፕሮቲን እና የፕሮቲን ግንኙነቶች በሴሉላር ሂደቶች እንደ ማባዛት፣ ግልባጭ፣ ትርጉም እና ሲግናል ማስተላለፍ ላይ ወሳኝ ሚና ይጫወታሉ።ስለዚህ እነዚህን የሴሉላር ሞለኪውሎች መስተጋብር በተለያዩ ሙከራዎች መለየት በጣም አስፈላጊ ነው። እርሾ አንድ ዲቃላ እና እርሾ ሁለት ዲቃላ ዲኤንኤ-ፕሮቲን እና ፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን ሁለት በብልቃጥ ላይ የተመሰረቱ ሙከራዎች ናቸው።
Yeast One Hybrid ምንድነው?
Yeast one hybrid (Y1H) በብልት ውስጥ የተመሰረተ የዲ ኤን ኤ-ፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን የሚደረግ ጥናት ነው። ይህ ዘዴ በ1993 በዋንግ እና ሪድ የተቋቋመ ሲሆን ከዚያን ጊዜ ጀምሮ በባዮሎጂካል ምርምር የበለጠ ኃይል አሳይቷል። በዚህ ዳሰሳ ውስጥ፣ ሁለት ዋና ዋና ክፍሎች አሉ፡ ዲ ኤን ኤ ባይት እና ፕሮቲን አዳኞች።
ሥዕል 01፡ እርሾ አንድ ድብልቅ
በሂደቱ ውስጥ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል (ዲ ኤን ኤ ባይት) በመጀመሪያ በሁለት የተለያዩ ዘጋቢዎች (ኤችአይኤስ3 ፣ ላክዜድ) ላይ ተቆልፏል።እነዚህ የጋዜጠኞች ግንባታዎች በአንድ የእርሾ ዝርያ ጂኖም ውስጥ የተዋሃዱ ናቸው. ግልባጭ ምክንያቶች እንደ ፕሮቲን አዳኞች ይወሰዳሉ። ግልባጭ ምክንያቶች የተዳቀሉ ፕሮቲኖችን ለመሥራት ከእርሾው Gal4 ግልባጭ ፋክተር ግልባጭ ገቢር ጎራ (AD) ጋር ተዋህደዋል። ይህ ሙሉ ድቅል ፕሮቲን ወደ እርሾ ውጥረቱ ከማስተዋወቅዎ በፊት ወደ ፕላዝማይድ የተዋሃደ ነው። የ recombinant plasmid ከገባ በኋላ፣ የጽሑፍ ግልባጭ ከዲ ኤን ኤ ክፍልፋይ ጋር ሲገናኝ፣ የኤ.ዲ.ዲ ክፍል የሪፖርተርን የጂን አገላለጽ (HIS3or LacZ) ያንቀሳቅሰዋል። የፕላስሚዶች ቅደም ተከተል ከዲ ኤን ኤ ክፍልፋዮች ጋር ሊያቆራኝ የሚችለውን ግልባጭ ለመለየት ያስችላል። በቅርብ ጊዜ, እርሾ አንድ የተዳቀለ ዘዴ በሽታን ለመመርመር ጥቅም ላይ ውሏል. ስለዚህ፣ ወደፊት፣ ይህ ትንታኔ በሳይንሳዊ ምርምር እና ህክምናዎች ላይ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል።
እርሾ ሁለት ድብልቅ ምንድነው?
Yeast two hybrid (Y2H) በብልት ውስጥ የተመሰረተ የውስጠ-ሴሉላር ፕሮቲን እና የፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን የሚደረግ ሙከራ ነው።ይህ ዘዴ በመጀመሪያ የተገኘው በ1989 በስታንሊ ፊልድስ እና ኦክ-ኪዩ ሶንግ ነው።
ምስል 02፡ እርሾ ሁለት ድብልቅ
በዚህ ዘዴ በመጀመሪያ ሁለት ውህዶች (ድብልቅ) የሚገነቡት የፍላጎት ፕሮቲኖችን በመጠቀም ነው፡ አንዱን ፕሮቲን ከዲኤንኤ ማሰሪያ ጎራ (ዲቢዲ) ጋር በማዋሃድ እና ሌላውን ፕሮቲን ከአክቲቪተር ዶሜይን (AD) የ Gal4 ቅጂ ፋክተር ጋር በማዋሃድ ነው።. ከዲቢዲ ጋር የተዋሃደው ፕሮቲን ባይት በመባል ይታወቃል፣ ከ AD ጋር የተዋሃደው ፕሮቲን ደግሞ አዳኝ በመባል ይታወቃል። በእርሾው ውጥረቱ፣ ማጥመጃው እና አዳኙ መስተጋብር ሲፈጠር፣ ዲቢዲ እና ኤዲዲ ከሪፖርተሩ ጂን ወደ ላይ የሚሰራ የGal4 ግልባጭ ምክንያት ለመፍጠር በቅርበት ይመጣሉ።የተግባር ግልባጭ ምክንያት የሪፖርተር ዘረ-መል አገላለፅን ያንቀሳቅሰዋል። በተጨማሪም ይህ ዘዴ በአሁኑ ጊዜ በአጥቢ አጥቢ ህዋሶች ውስጥ የሚገኙትን integral membrane ፕሮቲኖች መስተጋብርን ለማጣራት ጥቅም ላይ ይውላል።
በእርሾ አንድ ድብልቅ እና እርሾ ሁለት ዲቃላ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- እርሾ አንድ ዲቃላ እና እርሾ ሁለት ዲቃላ የዲኤንኤ-ፕሮቲን እና የፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን በቫይሮ ላይ የተመሰረቱ ሁለት ሙከራዎች ናቸው።
- እነዚህ ምርመራዎች የእርሾ ዝርያዎችን ይጠቀማሉ።
- ሁለቱም መገምገሚያዎች የGal4 ቅጂ ፋክተሩን የማግበር ጎራ (AD) ይጠቀማሉ።
- ግንኙነቶችን ለማግኘት የሪፖርተር ጂን (ኤችአይኤስ3፣ ወይም LacZ) አገላለጽ ይጠቀማሉ።
- ማጥመጃ እና አዳኝ አላቸው።
- ሁለቱም ምዘናዎች በዘመናዊ ባዮሎጂካል ምርምር በጣም ጠቃሚ ናቸው።
በእርሾ አንድ ዲቃላ እና እርሾ ሁለት ዲቃላ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Yeast one hybrid የዲኤንኤ እና የፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን በብልቃጥ ላይ የተመሰረተ ጥናት ሲሆን እርሾ ሁለት ሃይብሪድ ደግሞ የፕሮቲን እና የፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን በቫይሮ ላይ የተመሰረተ ጥናት ነው።ስለዚህ, ይህ በእርሾ አንድ ድብልቅ እና እርሾ ሁለት ድብልቅ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው. በተጨማሪም፣ በአንድ እርሾ ውስጥ፣ ማጥመጃው የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጭ ሲሆን አዳኝ ደግሞ የፕሮቲን ሞለኪውል ነው። በሌላ በኩል፣ በሁለቱ እርሾዎች ውስጥ ሁለቱም ማጥመጃዎች እና አዳኞች የፕሮቲን ሞለኪውሎች ናቸው።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በእርሾ አንድ ዲቃላ እና እርሾ ሁለት ድብልቅ መካከል ያለውን ልዩነት በሠንጠረዥ መልክ ጎን ለጎን ለማነፃፀር ይዘረዝራል።
ማጠቃለያ - እርሾ አንድ ድብልቅ vs እርሾ ሁለት ድብልቅ
እርሾ አንድ ዲቃላ እና እርሾ ሁለት ዲቃላ በብልቃጥ ውስጥ የተመሰረቱ ሁለት አስፈላጊ ምርመራዎች ናቸው። Yeast one hybrid የዲኤንኤ እና የፕሮቲን መስተጋብርን ለመተንተን በብልቃጥ ላይ የተመሰረተ ጥናት ሲሆን እርሾ ሁለት ድብልቅ የፕሮቲን እና የፕሮቲን ግንኙነቶችን ለመተንተን በብልቃጥ ላይ የተመሰረተ ሙከራ ነው። ስለዚህ፣ ይህ በ እርሾ አንድ ድብልቅ እና እርሾ ሁለት ድብልቅ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
