በተለመደው ጎጆ እና ቅጽበታዊ PCR ግምገማዎች መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የተለመደው PCR የተወሰኑ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን ለማጉላት የተሰራ ቴክኒክ እና የተከተተ PCR የመደበኛ PCR ማሻሻያ ሲሆን ይህም ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾችን ያቀፈ ሲሆን እውነተኛው ግን -time PCR የመደበኛ PCR ልዩነት ሲሆን ይህም የተጨመረውን ምርት ለመለካት ይችላል።
PCR በምርምር እና በህክምና በስፋት ጥቅም ላይ የዋለ ዲኤንኤን ለመለየት በጣም የተለመደ ሳይንሳዊ ዘዴ ነው። የ PCR ምርመራዎች አንቲጂኖችን ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ በመለየት ጥቅም ላይ ይውላሉ። በአጠቃላይ ፀረ እንግዳ አካላትን ከማግኘቱ በፊት ወይም የበሽታውን ምልክቶች ከማሳየቱ በፊት የቫይረስ አር ኤን ኤ በሰውነት ውስጥ ይገኛል.የ PCR ምርመራ አንድ ሰው ቫይረሱ እንዳለበት ወይም እንደሌለበት አስቀድሞ ማወቅ ይችላል። በአሁኑ ጊዜ PCR የኮቪድ-19 በሽታን ለመለየት መደበኛ ምርመራ ነው። እንደ እውነተኛ ጊዜ PCR፣ ጎጆ PCR፣ multiplex PCR፣ hot start PCR እና የረጅም ርቀት PCR፣ ወዘተ የመሳሰሉ የተለያዩ የ PCR ቴክኒኮች አሉ።
የተለመዱ PCR ግምገማዎች ምንድን ናቸው?
ተለምዷዊ PCR አሴይ በሞለኪውላር ባዮሎጂካል ላብራቶሪዎች ውስጥ በመደበኛነት የሚሰራ የ in vitro DNA ማጉላት ዘዴ ነው። ይህ ዘዴ ከአንድ የተወሰነ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጭ በሺዎች እስከ በሚሊዮን የሚቆጠሩ ቅጂዎችን ለማምረት አስችሏል. ካሪ ሙሊስ ይህንን ዘዴ በ1980 አስተዋወቀ።ይህ ዘዴ ብዙ ቅጂዎችን ለመስራት አብነት ተብሎ የሚጠራውን የዲኤንኤ ቁራጭ ይፈልጋል። ታክ ፖሊሜሬሴ እንደ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ኢንዛይም ሆኖ ይሰራል እና የአብነት ተከታታዮቹን አዲስ ክሮች ውህደት ያስተካክላል።
በፒሲአር ድብልቅ ውስጥ ያሉ ፕሪመሮች ለክባሪ ማራዘሚያዎች እንደ መነሻ ሆነው ይሰራሉ። የዲኤንኤ ቅጂዎችን ለመሥራት አስፈላጊ የሆኑት ሁሉም ንጥረ ነገሮች በ PCR ድብልቅ ውስጥ ተካትተዋል.የ PCR ምላሽ በ PCR ማሽን ውስጥ ይካሄዳል, እና በትክክለኛው PCR ድብልቅ እና በትክክለኛው PCR ፕሮግራም መመገብ አለበት. የምላሽ ቅይጥ እና ፕሮግራሙ ትክክል ከሆኑ፣ የሚፈለገውን የዲኤንኤ የተወሰነ ክፍል ከትንሽ ዲ ኤን ኤ ያወጣል።
ሥዕል 01፡ የተለመደ PCR Assay
በ PCR ምላሽ ውስጥ የተካተቱ ሶስት ዋና ዋና ደረጃዎች አሉ፡ denaturation፣ primer annealing እና strand extension። እነዚህ ሶስት ደረጃዎች በሦስት የተለያዩ የሙቀት መጠኖች ውስጥ ይከሰታሉ. PCR ቋት ለTaq polymerase እርምጃ ምቹ ሁኔታዎችን ይጠብቃል። የሚፈለገውን የ PCR ምርት መጠን ለማምረት እነዚህ ሶስት የ PCR ምላሽ ደረጃዎች ይደጋገማሉ። በእያንዳንዱ PCR ምላሽ, የዲኤንኤ ቅጂዎች ቁጥር በእጥፍ ይጨምራል.ስለዚህ, ገላጭ ማጉላት በ PCR ውስጥ ሊታይ ይችላል. የ PCR ምርት በጄል ላይ የሚታይ የዲ ኤን ኤ መጠን ስለሚያመነጭ ጄል ኤሌክትሮፎረሲስን በመጠቀም መፍታት ይቻላል እና እንደ ቅደም ተከተል ላሉ ተጨማሪ ጥናቶች ይጸዳል።
PCR በህክምና እና ባዮሎጂካል ምርምር ውስጥ ጠቃሚ መሳሪያ ነው። በተለይም በፎረንሲክ ጥናቶች፣ PCR ከጥቃቅን ወንጀለኞች ናሙናዎች ለምርምር ዲኤንኤን በማጉላት እና የፍትህ ዲኤንኤ መገለጫዎችን ስለሚያደርግ እጅግ በጣም ጥሩ ዋጋ አለው። PCR በብዙ የሞለኪውላር ባዮሎጂ ዘርፎች በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል፣ ጂኖታይፕ፣ ጂን ክሎኒንግ፣ ሚውቴሽን መለየት፣ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል፣ የዲኤንኤ ማይክሮአረይ እና የአባትነት ምርመራ።
Nsted PCR Assays ምንድን ናቸው?
Nsted PCR የዲኤንኤ ልዩ ያልሆነን ማጉላት የሚቀንስ PCR አይነት ነው። በጎጆ በተቀመጠ PCR assay ውስጥ ሁለት ተከታታይ PCRዎች ወይም ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾች አሉ። በመጀመሪያው የማጉላት ምላሽ, PCR ምርት ይዘጋጃል. ከመጀመሪያው ምላሽ በኋላ, የመጀመሪያው ምላሽ በ PCR ምርት ላይ ሁለተኛ የማጉላት ምላሽ ይከናወናል.ስለዚህ፣ በሁለተኛው ምላሽ ድብልቅ ውስጥ ያሉት ፕሪመርሮች ከመጀመሪያው PCR ምርት ጋር ይጣመራሉ እና ያጎላሉ።
ሥዕል 02፡ የተገጠመ PCR
ዋና ጥንዶች በእያንዳንዱ ምላሽ ይለያያሉ። የጎጆው PCR ውስጥ ልዩ ያልሆነ የፕሪመርስ ትስስር ቀንሷል። የተከማቸ የ PCR ሙከራዎች ትብነትን እና/ወይም ልዩነትን ለመጨመር ጠቃሚ ናቸው። ነገር ግን፣ የጎጆ PCR ፍላጎት ስላለው ቅደም ተከተል እውቀትን ይፈልጋል።
የእውነተኛ ጊዜ PCR ግምገማዎች ምንድናቸው?
የእውነተኛ ጊዜ PCR ወይም መጠናዊ PCR (Q PCR) የ PCR ምርቶችን በቁጥር የሚለካ የተሻሻለ የ PCR ስሪት ነው። ስለዚህ, ይህ ዘዴ በእውነተኛ ጊዜ PCR ማሽን በመጠቀም ማጉላትን በእውነተኛ ጊዜ ይቆጥራል. እንዲሁም በናሙና ውስጥ ያለውን የዒላማ ቅደም ተከተል ወይም ጂን መጠን ለመወሰን ተስማሚ ዘዴ ነው.
የእውነተኛ ጊዜ PCR አጓጊ ባህሪ ሁለቱንም ማጉላት እና እውነተኛ መጠንን ወደ አንድ እርምጃ ማጣመሩ ነው። ስለዚህ የጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስን የመለየት አስፈላጊነት በእውነተኛ ጊዜ PCR ዘዴ ሊወገድ ይችላል. በ PCR ምላሾች ወቅት PCR ምርቶችን ለመሰየም የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎችን መጠቀም ውሎ አድሮ ወደ ቀጥተኛ መጠን ይመራል። የ PCR ምርቶች በሚከማቹበት ጊዜ, የፍሎረሰንት ምልክቶችም እንዲሁ ይሰበሰባሉ, እና በእውነተኛ ጊዜ ማሽን ይለካሉ. SYBR አረንጓዴ እና ታክማን የእውነተኛ ጊዜ PCR የማጉላት ሂደትን ለመለየት ወይም ለመመልከት ሁለት ዘዴዎች ናቸው። ሁለቱም ዘዴዎች የማጉላት ሂደቱን ሂደት ይቆጣጠራሉ እና የምርቱን መጠን በቅጽበት ሪፖርት ያደርጋሉ።
ስእል 03፡ ሪል-ታይም PCR
የእውነተኛ ጊዜ PCR እንደ የጂን አገላለጽ መጠን፣ ማይክሮ አር ኤን ኤ እና ኮድ ያልሆነ አር ኤን ኤ ትንተና፣ SNP ጂኖታይፒንግ፣ የቅጂ ቁጥር ልዩነቶችን መለየት፣ ብርቅ ሚውቴሽንን መለየት፣ በዘረመል የተሻሻሉ ህዋሳትን ማግኘት እና የመሳሰሉ አፕሊኬሽኖች አሉት። ተላላፊ ወኪሎችን ማወቅ።
በመደበኛ ጎጆ እና በቅጽበታዊ PCR ግምገማዎች መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- የተያዙ እና ቅጽበታዊ PCR ግምገማዎች የመደበኛ PCR ግምገማ ማሻሻያዎች ናቸው።
- ሦስቱም ቴክኒኮች የዲኤንኤ ናሙናዎችን ያጎላሉ።
- ምርቶቻቸው በቅደም ተከተል ወይም በመተንተን ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ።
- እነዚህ ምርመራዎች ፕሪመር ያስፈልጋቸዋል።
በተለመደው Nsted እና ቅጽበታዊ PCR Assays መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
የተለመደ PCR የተወሰኑ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን ለማጉላት የተሰራ ቴክኒክ ነው። ይህ በእንዲህ እንዳለ፣ Nsted PCR ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾችን ያካተተ የመደበኛ PCR ማሻሻያ ነው፣ እና ቅጽበታዊ PCR የተስፋፋውን ምርት ለመለካት የሚያስችል የመደበኛ PCR ልዩነት ነው።ስለዚህ፣ ይህ በተለመደው የጎጆ እና የእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። ከተለምዷዊ እና ቅጽበታዊ PCR በተለየ፣ ጎጆ PCR ሁለት የፕሪመር ስብስቦችን ይጠቀማል። በተጨማሪም፣ የተለየ ያልሆነ ማጉላትን ለመቀነስ በጎጆ PCR ውስጥ ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾች አሉ። በተጨማሪም፣ የተለመደው እና የእውነተኛ ጊዜ PCR ሙከራዎች ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾችን አልያዙም።
የሚከተለው ኢንፎግራፊ በተለመደው የጎጆ እና የአሁናዊ PCR ትንታኔዎች መካከል ያለውን ልዩነት በሠንጠረዥ መልክ ጎን ለጎን ለማነፃፀር ይዘረዝራል።
ማጠቃለያ - መደበኛ ከNsted vs Real-time PCR Assays
ተለምዷዊ PCR የተወሰኑ የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን ለማጉላት የተሰራ የመጀመሪያው ዘዴ ነው። Nsted PCR እና ቅጽበታዊ PCR ሁለት የተለመዱ PCR ዓይነቶች ናቸው። ሁለት ተከታታይ የማጉላት ምላሾች እና በጎጆ PCR ውስጥ ሁለት የፕሪመር ስብስቦች አጠቃቀም አሉ። የእውነተኛ ጊዜ PCR የተሰራው የተጨመረውን PCR ምርት ለመለካት ነው። ስለዚህ፣ ይህ በተለመደው ጎጆ እና በእውነተኛ ጊዜ PCR መካከል ያለውን ልዩነት ያጠቃልላል።
