በኮሎሪሜትሪክ እና በፍሎሮሜትሪክ አሴይ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የቀለም ውህዶች በመፍትሔ ውስጥ ያለውን ትኩረት የሚወስን ሲሆን ፍሎሮሜትሪክ assay ደግሞ የመፍትሄውን እንቅስቃሴ የሚወስን ነው።
ባዮኬሚካል ምርመራ የአንድ ባዮሎጂካል ሞለኪውል ወይም ንጥረ ነገር እንቅስቃሴን በመተንተን የሚለይ ወይም የሚለካ ዘዴ ነው። ኢንቪትሮ ሂደት ነው። Colorimetric assay እና fluorometric assay በቤተ ሙከራ ውስጥ የሚካሄዱ ሁለት ዓይነት የተለመዱ ባዮኬሚካል ሙከራዎች ናቸው። እንደ ELISA እና western blotting ያሉ በርካታ ቴክኒኮች የሜታቦሊክ እንቅስቃሴን ለመለካት እና እንደ ፕሮቲኖች ፣ ኢንዛይሞች እና ሌሎች ትናንሽ ሞለኪውሎች ያሉ የባዮሞለኪውሎች ተግባራዊ ባህሪን ለመለካት ውስብስብ ባዮኬሚካላዊ ሙከራዎች ናቸው።እነዚህ አይነት ምርመራዎች የፕሮቲን-ዲኤንኤ፣ የፕሮቲን-አር ኤን ኤ እና የፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብርን ለመለየት ያገለግላሉ።
Colorimetric Assay ምንድነው?
የቀለም ውህዶች በመፍትሔ ውስጥ ያለውን ትኩረት የሚወስን ዘዴ ነው። በሌላ አነጋገር, colorimetric assay በ reagents እና analytes መካከል ባለው ኢንዛይም ወይም ኬሚካላዊ ምላሽ ምክንያት ወደ ቀለም ለውጥ የሚመራ ምላሽ ነው. የኮሎሪሜትሪክ ሙከራዎች ኢንዛይሞችን ፣ የተወሰኑ ውህዶችን ፣ ሆርሞኖችን ፣ ፀረ እንግዳ አካላትን እና ሌሎች ትንታኔዎችን ለመፈተሽ በባዮኬሚስትሪ ውስጥ ይለማመዳሉ። የቀለም መለኪያዎችን ወይም ስፔክትሮፕቶሜትሮችን ይጠቀማሉ. የቀለም መለኪያዎች ተጨባጭ የቀለም ባህሪያትን ለማቅረብ ባለቀለም ናሙናዎችን የሚያሳዩ መሳሪያዎች ናቸው. ስፔክትሮፎቶሜትር የብርሃን ጥንካሬን እንደ የብርሃን ቀለም ወይም የሞገድ ርዝመት የሚለካ መሳሪያ ነው።
ሥዕል 01፡ Colorimetric Assay
Colorimetric Assay እንዴት ይሰራል?
በኮሎሪሜትሪክ ግምገማ ውስጥ አንድ ሳህን የሚዘጋጀው ከጉድጓድ ጋር የታሰረ ልዩ ፀረ እንግዳ አካል ያለው ነው። ከዚያም ናሙናው ተጨምሯል. ይህ ናሙናው ከፀረ እንግዳ አካላት ጋር እንዲጣመር ያስችለዋል. ከዚያም ማወቂያ ፀረ እንግዳ እና አንድ substrate ወደ ጉድጓዶች ታክሏል ማወቂያ ምርመራ ጋር ምላሽ. የማቆሚያ መፍትሄ ከማንበብ በፊት መጨረሻ ላይ ተጨምሯል. ባዶ የሚባል ባዶ ጉድጓድ ያለ ናሙና ይቀራል. በኮሎሪሜትሪክ ትንታኔ ውስጥ, ጥቁር ቀለም, የትንታኔ ትኩረትን ይጨምራል. ብዙውን ጊዜ ንባቡን ለመውሰድ አንድ የሞገድ ርዝመት ብቻ ያስፈልጋል. ነገር ግን የማጣቀሻ መለኪያ ካለ ሁለት ወይም ከዚያ በላይ የሞገድ ርዝመቶች ጥቅም ላይ ይውላሉ።
Fluorometric Assay ምንድን ነው?
የፍሎሜትሪክ ምርመራ የኢንዛይም ግብረመልሶችን እንቅስቃሴ የሚወስን ዘዴ ነው። የፍሎረሜትሪክ ሙከራ የሚከናወነው ከፍሎረሰንት ምርት ወይም በተቃራኒው የፍሎረሰንት ምርት ሲፈጠር ነው።ይህ አተያይ በተጨማሪም የፍሎረሰንስ ድምጽ ማጉያ ኢነርጂ ማስተላለፍን (FRET) ይጠቀማል፣ የኢንዛይማቱ ምላሽ ሁለት ፍሎሮፎሮችን በመሬት ውስጥ ያለውን ቦታ ይለውጣል፣ የፍሎረሰንስ ጥንካሬን ይለውጣል።
ስእል 02፡ Fluorometric Assay
Fluorometric assays በአጠቃላይ ከሌሎች ግምገማዎች በጣም ስሜታዊ ናቸው። በታካሚዎች በቲሹ፣ በሴል ወይም በፈሳሽ ናሙናዎች ላይ ያለው የምርመራ ኢንዛይም ግምቶች ከፍ ባለ ስሜት ምክንያት ይጨምራሉ።
Fluorometric Assay እንዴት ይሰራል?
በፍሎሮሜትሪክ መመዘኛ፣ በጠፍጣፋው ውስጥ ባለው ናሙና ውስጥ አንድ ንጣፍ ይጨመራል፣ እና የፍሎረሰንት ምላሹ የሚወሰደው የሰሌዳ አንባቢን በመጠቀም ነው። እዚህ እያንዳንዱ ሕዋስ በተናጠል ይለካል. ግልጽ ያልሆነ ሰሌዳዎች በ fluorometric assays ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ. ይህ የብርሃን መበታተን ይቀንሳል.ለዚህ ዓይነቱ ምርመራ ሁለት የሞገድ ርዝመቶች አስፈላጊ ናቸው. አንደኛው የሞገድ ርዝማኔ አነሳሽነቱን ማወቅ ሲሆን ሌላኛው የሞገድ ርዝመቱ ልቀትን መለየት ነው።
በColorimetric እና Fluorometric Assay መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- Colorimetric assay እና fluorometric assay ሁለት አይነት ባዮኬሚካል ሙከራዎች ናቸው።
- ሁለቱም ምርመራዎች የሚከናወኑት ለህክምና ምርመራ ነው።
- እነዚህ ምርመራዎች የኢንዛይም ምላሽን ያካትታሉ።
- ሁለቱም ምዘናዎች ንኡስ ክፍል እና ትንታኔዎችን ያካትታሉ።
በ Colorimetric እና Fluorometric Assay መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ኮሎሪሜትሪክ አተያይ የቀለም ውህዶችን በመፍትሔ ውስጥ ያለውን ትኩረት የሚወስን ቴክኒክ ሲሆን ፍሎሮሜትሪክ assay ደግሞ የኢንዛይም ምላሽ እንቅስቃሴን የሚወስን ዘዴ ነው። ስለዚህ, ይህ በቀለም እና በፍሎሜትሪክ ጥናት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው. ከዚህም በላይ የፍሎሜትሪክ መመርመሪያዎቹ ከቀለም ልምምዶች የበለጠ ስሜታዊ ናቸው; ስለዚህ, የፍሎሜትሪክ ሙከራዎች ተጨማሪ ትንታኔዎችን የማወቅ ችሎታ አላቸው.ስለዚህ, ይህ በቀለም እና በፍሎሜትሪክ ጥናት መካከል ሌላ አስፈላጊ ልዩነት ነው. በተጨማሪም የፍሎሮሜትሪክ ሙከራዎች ሁለት የሞገድ ርዝመቶች የሚያስፈልጋቸው ሲሆን ባለቀለም መለኪያዎች በአንድ የሞገድ ርዝመት ይከናወናሉ።
ከታች ያለው ኢንፎግራፍያዊ በኮሪሜትሪክ እና በፍሎሮሜትሪክ አሴይ መካከል ያለውን ልዩነት ያሳያል።
ማጠቃለያ – Colorimetric vs Fluorometric Assay
አንድ ባዮኬሚካላዊ ትንታኔ ሴሉላር ሜታቦሊዝምን ለመወሰን እና ለመለካት የሚያገለግል የትንታኔ ሂደት ነው። Colorimetric assay እና fluorometric assay ሁለት አይነት ባዮኬሚካል ሙከራዎች ናቸው። Colorimetric assay በ reagents እና analytes መካከል ባለው ኢንዛይማቲክ ወይም ኬሚካላዊ ምላሽ ምክንያት ወደ ቀለም ለውጥ የሚያመጣ ምላሽ ሲሆን ፍሎሮሜትሪክ assay የኢንዛይም ምላሽን እንቅስቃሴን ለመወሰን የሚያገለግል ዘዴ ነው። ሁለቱም መመዘኛዎች substrate እና analyte በሚያካትተው ኢንዛይም ምላሽ ላይ የተመሰረቱ ናቸው። የፍሎሮሜትሪክ ሙከራዎች ከቀለም ግኝቶች የበለጠ ስሜታዊ ናቸው። ከሁሉም በላይ የፍሎሜትሪክ ሙከራዎች ሁለት የሞገድ ርዝመቶች ያስፈልጋሉ, የቀለም መለኪያዎች በአንድ የሞገድ ርዝመት ብቻ ሊከናወኑ ይችላሉ.ስለዚህ፣ ይህ በኮሎሪሜትሪክ እና በፍሎሮሜትሪክ አሴይ መካከል ያለውን ልዩነት ያጠቃልላል።
