በቢሲኤ እና ብራድፎርድ assay መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የቢሲኤ ሙከራ ጊዜ የሚወስድ እና ብዙም ትክክለኛ ያልሆነ ሲሆን የብራድፎርድ ግን ፈጣን እና ትክክለኛ ነው።
BCA እና Bradford assay የፕሮቲን ትኩረትን የሚወስኑ ሁለት የምርመራ ዘዴዎች ናቸው። እነዚህ ሁለት ግምገማዎች የተለያዩ የመመዘኛ መርሆዎች እና በትክክለኛነታቸው ላይ ልዩነቶች አሏቸው።
BCA Assay ምንድነው?
BCA assay ወይም bicinchoninic acid assay የባዮኬሚካላዊ ጥናት አጠቃላይ የፕሮቲን መጠንን በመፍትሔ ውስጥ ለመወሰን ይጠቅማል። ይህ ዘዴ ከፈጣሪው ፖል ኬ ስሚዝ በኋላ ስሚዝ አስሳይ ተብሎም ተሰይሟል። ይህ የትንታኔ ዘዴ ከሎውሪ ፕሮቲን አሴይ፣ ከ Bradford protein assay ወይም biuret reagent ጋር ተመሳሳይነት ያሳያል።ከአረንጓዴ ወደ ወይን ጠጅ የሚሄደውን የናሙና መፍትሄ ቀለም በመቀየር በተሰጠው ናሙና ውስጥ ያለውን አጠቃላይ የፕሮቲን መጠን መመልከት እንችላለን። ይህ የቀለም ለውጥ የሚከሰተው ከፕሮቲን ይዘት ጋር በተመጣጣኝ መጠን ነው. ከዚያ በኋላ በናሙና ውስጥ ያለውን የቀለም መጠን እና የፕሮቲን ይዘት ለመተንተን የቀለም ቴክኒክን መጠቀም እንችላለን።
BCA የፕሮቲን ግምት ዘዴ
የቢሲኤ አሴይ ዘዴን ግምት ውስጥ በማስገባት የተለመደው የቢሲኤ መፍትሄ ወደ 11.25 የሚጠጋ ፒኤች ያለው ከፍተኛ የአልካላይን መፍትሄ ይይዛል እና በዚህ መፍትሄ ውስጥ የሚገኙት ንጥረ ነገሮች ቢሲንኮኒኒክ አሲድ፣ ሶዲየም ካርቦኔት፣ ሶዲየም ባይካርቦኔት፣ ሶዲየም tartrate እና መዳብ (II) ሰልፌት pentahydrate. ይህ ጥናት በዋናነት በሁለት ኬሚካላዊ ምላሾች ላይ የተመሰረተ ነው፡- የመዳብ (II) ወደ መዳብ (I) በፕሮቲን ውስጥ በፔፕታይድ ቦንዶች በመቀነስ እና ሁለት የቢኪንቾኒኒክ አሲድ ሞለኪውሎች ከመዳብ (I) ion ጋር በመቀነስ ሐምራዊ ቀለም ያለው ውስብስብ ውጤት ያስከትላል. ብርሃንን በ 562 nm የሞገድ ርዝመት አምጡ። በመጀመሪያው ምላሽ, በፔፕታይድ ቦንዶች የተቀነሰው የመዳብ (II) መጠን በናሙናው ውስጥ ካለው የፕሮቲን መጠን ጋር ተመጣጣኝ ነው.
ብራድፎርድ አሳይ ምንድነው?
Bradford assay በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን ለመለካት የሚጠቅም የስፔክትሮስኮፒክ ትንተና ዘዴ ነው። ይህ ዘዴ በማሪዮን ኤም. ብራድፎርድ በ1976 የተሰራ ሲሆን በአንፃራዊነት ፈጣን እና ትክክለኛ ዘዴ ነው።
የፕሮቲን እና የብራድፎርድ ሬጀንት የቀለም ምላሽ
በናሙና ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን መጠን ለማወቅ ይህንን ዘዴ መጠቀም እንችላለን። በዚህ ምርመራ ወቅት በናሙናው ውስጥ የሚፈጠረው ኬሚካላዊ ምላሽ በናሙናው ውስጥ ባለው የፕሮቲን አሚኖ አሲድ ስብጥር ላይ ብቻ የተመካ ነው።
ብራድፎርድ የፕሮቲን ግምት ዘዴ
የዚህን መመዘኛ ዘዴ ስናጤን ኮማሴ ብሪሊየንት ብሉ ጂ-250 በተሰየመው ማቅለሚያ የመምጠጥ ለውጥ ላይ የተመሰረተ የኮሎሪሜትሪክ ፕሮቲን ምርመራ ነው። በአጠቃላይ ይህ ቀለም በሦስት ዓይነት አኒዮኒክ (ሰማያዊ) መልክ፣ ገለልተኛ (አረንጓዴ) ቅርጽ እና ካቲኒክ (ቀይ) መልክ አለ። ስለዚህ, በአሲዳማ ሁኔታዎች ውስጥ, ቀለም ከቀይ ወደ ሰማያዊ ቀለም ይለውጣል. ይህ የሆነበት ምክንያት ፕሮቲን ከቀለም ጋር በማያያዝ ነው. በተቃራኒው, ከቀለም ጋር የሚጣመር ፕሮቲን ከሌለ, የቀለም ለውጥ አይታይም, መፍትሄው ቀይ-ቡናማ ቀለም ያገኛል. ይህ ቀለም በቫን ደር ዋል ሃይሎች እና በኤሌክትሮስታቲክ መስህቦች አማካኝነት ከፕሮቲን የካርቦክሳይል ቡድን ጋር ጠንካራ እና የማይዋሃድ ስብስብ መፍጠር ይችላል።
በቢሲኤ እና ብራድፎርድ አሳይ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
BCA እና Bradford assay የፕሮቲን ትኩረትን የሚወስኑ ሁለት የምርመራ ዘዴዎች ናቸው። እነዚህ ሁለት ምርመራዎች የተለያዩ የመመርመሪያ መርሆዎች እና በትክክለኛነታቸው ላይ ልዩነት አላቸው. በ BCA እና Bradford assay መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት BCA አሴይ ጊዜ የሚወስድ እና ብዙም ትክክለኛ ያልሆነ ሲሆን የብራድፎርድ ግን ፈጣን እና ትክክለኛ ነው።
የሚከተለው ኢንፎግራፊክ በቢሲኤ እና በብራድፎርድ assay መካከል ያለውን ልዩነት በሰንጠረዥ መልኩ ያጠቃልላል።
ማጠቃለያ – BCA vs Bradford Assay
BCA assay ወይም bicinchoninic acid assay የባዮኬሚካላዊ ጥናት አጠቃላይ የፕሮቲን መጠንን በመፍትሔ ውስጥ ለመወሰን ይጠቅማል። ብራድፎርድ assay በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን ለመለካት የሚጠቅም ስፔክትሮስኮፒክ ትንተና ዘዴ ነው። በ BCA እና Bradford assay መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት BCA ጊዜ የሚወስድ እና ብዙም ትክክለኛ ያልሆነ ሲሆን የብራድፎርድ ግን ፈጣን እና ትክክለኛ ነው።
