በኤሊሳ እና በኤልስፖት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ኤሊሳ ከኤንዛይም ጋር የተያያዘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን ሚስጥራዊ የሆኑ የምልክት ፕሮቲኖችን አጠቃላይ ትኩረትን የሚወስን ሲሆን ኤልስፖት ደግሞ ከኤንዛይም ጋር የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን በግለሰብ ደረጃ የሳይቶኪን ሚስጥራዊ ሴሎችን ለይቶ ማወቅ ነው።
ኤሊሳ እና ኤሊስፖት ከኤንዛይም ጋር የተገናኙ የበሽታ መከላከያ ምርመራዎች በመድኃኒት፣ በእፅዋት ፓቶሎጂ፣ በባዮቴክኖሎጂ እና በተለያዩ የፋርማሲዩቲካል ኢንዱስትሪዎች በስፋት ጥቅም ላይ ይውላሉ። በእነዚህ ቴክኒኮች ውስጥ የፕሮቲን ተንታኝ በፀረ እንግዳ አካላት ላይ ተመርኩዞ ተገኝቷል። ኤሊሳ በቤተ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው በጣም ታዋቂው ኢንዛይም-የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ነው። በሌላ በኩል ኤሊስፖት ከኤሊሳ ይልቅ ጥቅም ላይ ያልዋለ ነገር ግን ከኤሊሳ በተጨማሪ በቤተ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውል ኢንዛይም-የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ነው።
ኤሊሳ አሳይ ምንድነው?
ኤሊሳ ከኤንዛይም ጋር የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን ሚስጥራዊ የሆኑ የምልክት ፕሮቲኖችን አጠቃላይ ትኩረትን የሚወስን ነው። በ 1971 ለመጀመሪያ ጊዜ በኤንንግቫል እና ፐርልማን የተገለፀው በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለ የትንታኔ ባዮኬሚስትሪ ጥናት ነው። ይህ ዘዴ በፈሳሽ ናሙና ውስጥ የተወሰነ ፕሮቲን መኖሩን ለመለየት ጠንካራ-ደረጃ የሆነ የኢንዛይም immunoassay ይጠቀማል። ይህ ጥናት በህክምና፣ በእፅዋት ፓቶሎጂ እና በባዮቴክኖሎጂ ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውል የምርመራ መሳሪያ ነው።
የELISA ሙከራ ሜካኒዝም
በአብዛኛው የELISA ፈተና፣ መጠኑ ያልታወቀ አንቲጂን በጠንካራ ድጋፍ (ማይክሮ ሊትር ሳህን) መጀመሪያ ላይ አይንቀሳቀስም። ከዚያም የሚዛመደው ዋናው ፀረ እንግዳ አካል በጠንካራው የድጋፍ ወለል ላይ ይተገበራል. ይህ ፀረ እንግዳ አካል ከ አንቲጂን (አንቲጂን-አንቲቦዲ ውስብስብ) ጋር ውስብስብ ይፈጥራል. ከኤንዛይም ጋር በባዮኮንጁግጅሽን አማካኝነት በተገናኘ በሁለተኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካል የሚገኘው አንቲጂን ቦርድ አንደኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካል ሊታወቅ ይችላል።በኤሊሳ ሙከራ የመጨረሻ ደረጃ ላይ የኢንዛይም ንጥረ ነገርን የያዘ ንጥረ ነገር ተጨምሯል። የአንደኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካላት ከአንቲጂን ጋር በትክክል ማያያዝ ካለ ፣ ሊታወቅ የሚችል የቀለም ለውጥ በ substrate ይፈጠራል። በመጨረሻም፣ ይህ በናሙና ውስጥ ያለውን አንቲጂን መጠን ይቆጥራል።
ስእል 01፡ የተለያዩ የኤሊሳ ዓይነቶች
ከተጨማሪ፣ ለኤሊሳ የተለያዩ አቀራረቦች አሉ፣እንደ ቀጥታ ኤሊሳ እና ቀጥተኛ ያልሆነ ኤሊሳ። በአሁኑ ጊዜ እንደ ማይኮባክቲሪየም ሳንባ ነቀርሳ፣ ሮታቫይረስ፣ ሄፓታይተስ ቢ ቫይረስ፣ ሄፓታይተስ ሲ ቫይረስ፣ ኢንቴቶክሲን የሚያመነጨው ኢ.ኮሊ፣ ኤች አይ ቪ እና SARS-CoV-2 ያሉ የሰው በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ለመለየት የተለያዩ የኤሊሳ ምርመራዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ።
Elispot Assay ምንድነው?
Elispot ከኤንዛይም ጋር የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን ይህም የግለሰብ ሳይቶኪን ሚስጥራዊ ሴሎችን ለይቶ ማወቅ ነው። ሴሲል ቼርኪንስኪ ELISpotን ለመጀመሪያ ጊዜ የገለፀው በ1983 ነው።ለአንድ ነጠላ ሕዋስ የሳይቶኪን ፈሳሽ ድግግሞሽ መጠን በመለካት ላይ የሚያተኩር የምርመራ አይነት ነው። በተጨማሪም ፀረ እንግዳ አካላትን የሚጠቀም ባዮሎጂያዊ ወይም ኬሚካላዊ ፕሮቲን ተንታኝ እንደሆነ ተመድቧል። Fluorospot assay የበርካታ ትንታኔዎችን (ይበልጥ ሚስጥራዊ ፕሮቲኖችን) ለመተንተን ፍሎረሴንስን የሚጠቀመው የኤሊስፖት ምርመራ ልዩነት ነው።
የኤልስፖት ሙከራ ሜካኒዝም
በዚህ ዘዴ፣ ሳይቶኪን የተወሰኑ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት ወደ ማይክሮሊትር ፕሌትስ ጉድጓዶች ይጨመራሉ። ከዚያም የተመለከቱት ተፈላጊ ሴሎች ወደ ጉድጓዶች ይጨምራሉ. በኋላ, ህዋሳቱ ተፈጥረዋል. ሴል በሚፈጠርበት ጊዜ ሴሎቹ ለማንኛውም ማነቃቂያ ምላሽ እንዲሰጡ እና ሳይቶኪን እንዲስሉ ይፈቀድላቸዋል. ሴሎቹ በሳይቶኪን ልዩ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት የተከበቡ ስለሆኑ በተፈጠሩት ህዋሶች የወጡ ሳይቶኪኖች ፀረ እንግዳ አካላት ጋር ይያያዛሉ።
ስእል 02፡ Elispot Assay
እነዚህን የሳይቶኪን ልዩ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ለመለየት ባዮቲንላይትድ ልዩ ልዩ ፀረ እንግዳ አካላት ወደ ጉድጓዱ ውስጥ ይጨመራሉ። ባዮቲኒላድ ልዩ ማወቂያ ፀረ እንግዳ አካላት በውኃ ጉድጓዶች ውስጥ የሚገኙትን ሳይቶኪን የተወሰኑ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ይይዛሉ። ከዚህም በላይ streptavidin-enzyme conjugates ከተለዩ ፀረ እንግዳ አካላት ጋር ለማያያዝ ወደ ጉድጓዶች ውስጥ ይጨምራሉ. በመጨረሻው ደረጃ ላይ, ወደ ጉድጓዶቹ ውስጥ የተወሰኑ ንጣፎች ተጨምረዋል. የኢንዛይም ውህዶች እና ንጥረ ነገሮች ምላሽ በጉድጓዶቹ ውስጥ የተለዩ ቦታዎችን ይፈጥራሉ። እነዚህ የተለዩ ቦታዎች የሚነበቡት በራስ-ሰር ELISpot አንባቢ ላይ ነው። በመጨረሻም፣ ይህ የሳይቶኪን ፈሳሽ ድግግሞሽን የበለጠ ያሰላል።
በኤሊሳ እና በኤልስፖት መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ሁለቱም ከኤንዛይም ጋር የተገናኙ የበሽታ መከላከያ ምርመራዎች ናቸው።
- ሁለቱም ምርመራዎች የተወሰኑ የፕሮቲን ትንታኔዎችን ያገኙታል።
- እነዚህ ምርመራዎች የፕሮቲን ትንታኔዎችን ለመለየት የተወሰኑ ፀረ እንግዳ አካላትን ይጠቀማሉ።
- ሁለቱም መመዘኛዎች ኢንዛይሞችን እና ንዑሳን ክፍሎችን ይጠቀማሉ።
- በህክምና ላቦራቶሪዎች ውስጥ እንደ መመርመሪያ መሳሪያ ያገለግላሉ።
በኤሊሳ እና ኤሊስፖት መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ኤሊሳ ከኤንዛይም ጋር የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን ሚስጥራዊ የሆኑ የምልክት ፕሮቲኖችን አጠቃላይ ትኩረትን የሚወስን ነው። በሌላ በኩል ኤሊስፖት ከኤንዛይም ጋር የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ ሲሆን ይህም የግለሰብ ሳይቶኪን ሚስጥራዊ ሴሎችን ይለካል። ስለዚህ በኤሊሳ እና በኤልስፖት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ይህ ነው። ከዚህም በላይ በኤሊሳ ፈተና ውስጥ አንቲጂን በመጀመሪያ በማይክሮ ሊትር ጉድጓዶች ላይ አይንቀሳቀስም. በአንጻሩ፣ በኤልስፖት ፈተና፣ ፀረ እንግዳ አካላት በመጀመሪያ በማይክሮ ሊትር ጉድጓዶች ላይ እንዳይንቀሳቀሱ ይደረጋል። ስለዚህ፣ ይህ በኤሊሳ እና ኤሊስፖት መካከል ያለው ሌላ ልዩነት ነው።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በኤሊሳ እና በኤልስፖት መካከል ያለውን ልዩነት በሰንጠረዥ መልክ በዝርዝር ያቀርባል።
ማጠቃለያ - Elisa vs Elispot
ኤሊሳ እና ኤሊስፖት ከኤንዛይም ጋር የተገናኙ የበሽታ መከላከያ ምርመራዎች በመድኃኒት፣ በእፅዋት ፓቶሎጂ፣ በባዮቴክኖሎጂ እና በተለያዩ የፋርማሲዩቲካል ኢንዱስትሪዎች በስፋት ጥቅም ላይ ይውላሉ። ኤሊሳ በሊጋንድ ላይ የሚመሩ ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም በፈሳሽ ናሙና ውስጥ የሊጋንድ (ፕሮቲን) መኖሩን ታውቃለች። Elispot assay የበሽታ መከላከያ ምላሽን ለመቆጣጠር በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለ ዘዴ ነው። ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም የነጠላ ሳይቶኪን ሚስጥራዊ ሴሎችን ይለያል። እሱ ሁለቱም የበሽታ መከላከያ እና ባዮአሳይ ዘዴ ነው። ስለዚህ፣ ይህ በኤሊሳ እና በኤልስፖት መካከል ያለው ልዩነት ማጠቃለያ ነው።
