የኤፍ.ፒ.ኤል.ሲ እና ኤችፒኤልሲ ቁልፍ ልዩነት FPLC እንደ ፕሮቲኖች፣ ኑክሊዮታይድ እና peptides ያሉ ትላልቅ ባዮሞለኪውሎችን የሚያጠራ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሲሆን ኤችፒኤልሲ ደግሞ አነስተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ውህዶችን የሚለይ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ነው።
ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ናሙናን ወደ ግል ክፍሎቹ ለመለየት የሚያገለግል ዘዴ ነው። ይህ መለያየት የሚከሰተው የተወሰኑ ናሙናዎች ከሞባይል እና የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች ጋር በመገናኘታቸው ነው። በናሙና ውስጥ ያሉ አካላት በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ላለው የሞባይል ደረጃ በእያንዳንዱ አካል ቅርበት ላይ ተመስርተው ይለያያሉ። የሞባይል ደረጃ እና ናሙና በአንድ አምድ ውስጥ ሲያልፉ, የናሙናው ክፍሎች በ UV-VIS ስፔክትሮስኮፒ ሊገኙ ወደሚችሉ ባንዶች መለየት ይጀምራሉ.ስለዚህ FPLC እና HPLC ሁለት አይነት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ናቸው።
FPLC ምንድን ነው?
FPLC እንደ ፕሮቲኖች፣ ኑክሊዮታይድ እና peptides ያሉ ትላልቅ ባዮሞለኪውሎችን የሚያጸዳ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አይነት ነው። ፈጣኑ ፕሮቲን ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (ኤፍ.ፒ.ኤል.ሲ) ለመጀመሪያ ጊዜ በስዊድን በፋርማሲያ ኩባንያ በ1982 ተሰራ። ብዙ ጊዜ የፕሮቲን ውህዶችን ለመተንተን ወይም ለማጣራት ያገለግላል። ይህ የሚከናወነው ፈሳሽ (ተንቀሳቃሽ ደረጃ) እና ባለ ቀዳዳ ጠንካራ ቁሳቁስ (የማይንቀሳቀስ ደረጃ) የናሙና አካላት ትስስር መርህ ላይ በመመርኮዝ ነው። በኤፍፒኤልሲ፣ የሞባይል ደረጃ ቋት ነው፣ እና ቋሚው ደረጃ በጥራጥሬዎች የተዋቀረ ሙጫ ነው። እሱ ብዙውን ጊዜ በሲሊንደሪክ መስታወት ወይም በፕላስቲክ አምድ ውስጥ የታሸገ የተሻገረ አጋሮዝ ይይዛል።
ምስል 01፡ FLPC (ፈጣን ፕሮቲን ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ) አፓርተማ
በአብዛኛው የFLPC ስትራቴጂ፣ ion exchange resin ጥቅም ላይ ይውላል። ስለዚህ, የፍላጎት ፕሮቲን በክፍያ መስተጋብር ወደ ሙጫው ይጣመራል. የ FLPC ቴክኒክ እንዲሁ ሁለት ማቋቋሚያዎችን ይጠቀማል፡ ቋት 1 (የሩጫ ቋት) እና ቋት 2 (የኤሉሽን ቋት)። መጀመሪያ ላይ ቋት እና የናሙና ድብልቅ በአምዱ ውስጥ ሲሮጡ፣ በድብልቅ ውስጥ ያለው ፍላጎት ያለው ፕሮቲን በቻርጅ መስተጋብር ወደ ሙጫው ይጣመራል። ነገር ግን የፍላጎት ፕሮቲን ተለያይቷል እና በሂደቱ መጨረሻ ላይ የኤሌክትሮማግኔቲክ ቋት በአምዱ ውስጥ ሲያልፍ በኤሌትዩሽን ቋት ውስጥ ወደ መፍትሄ ይመለሳል. በኋላ, መፍትሄው (የፍላጎት ፕሮቲን የያዘው ኢሉአንት) በሁለት ጠቋሚዎች ውስጥ ያልፋል, ይህም የጨው ክምችት እና የፕሮቲን መጠን ይለካሉ. እያንዳንዱ ፕሮቲን ሲለቀቅ፣ በምርመራው ወቅት እንደ “ከፍተኛ” ሆኖ ይታያል እና ለቀጣይ ጥቅም ሊሰበሰብ ይችላል።
HPLC ምንድን ነው?
HPLC ትናንሽ ሞለኪውላዊ ክብደት ውህዶችን የሚለይ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አይነት ነው። እ.ኤ.አ. በ 1969 ፣ የመጀመሪያው HPLC በዋተርስ ኮርፖሬሽን ፣ ዩኤስኤ በንግድ ተሰራ።ከፍተኛ አፈፃፀም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) ውስጥ የናሙና ድብልቅ (አናላይት) በሟሟ (ሞባይል ደረጃ) ውስጥ በአንድ አምድ ውስጥ በከፍተኛ ግፊት chromatographic ማሸጊያ ቁሳቁስ (የቋሚ ደረጃ) ውስጥ ይጣላል። የናሙና ቅይጥ የሚከናወነው በሂሊየም ወይም በናይትሮጅን በሚንቀሳቀስ ተሸካሚ ጋዝ ዥረት ነው።
ስእል 02፡ HPLC (ከፍተኛ አፈጻጸም ፈሳሽ Chromatography)
በናሙና ቅይጥ ውስጥ ያሉት ክፍሎች ከቋሚው ክፍል ጋር ያለው መስተጋብር በትንሹ መጠን ወይም ከተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ጋር ያለው መስተጋብር በፍጥነት ከአምዱ ይወጣሉ። በሌላ በኩል፣ በናሙና ቅይጥ ውስጥ ያሉት ክፍሎች ከቋሚው ክፍል ጋር ከፍተኛ መጠን ያለው መስተጋብር ወይም ከሞባይል ደረጃ ጋር ያለው መስተጋብር አነስተኛ መጠን ያላቸው ክፍሎች ከአምዱ ቀስ ብለው ይወጣሉ። ከላይ በተጠቀሰው የመስተጋብር መርህ ላይ በመመርኮዝ የናሙና ቅልቅል አካላት ሊለያዩ ይችላሉ.ከዚህም በላይ የመሳሪያው ጠቋሚ ከአምዱ የሚወጣውን የናሙና ድብልቅ እያንዳንዱን ክፍል ይለያል. HPLC እንደ መድሀኒት ፣ መርዞች ወይም ፀረ-ተባይ መድሃኒቶች ያሉ የታወቁ ውህዶች መኖር ወይም አለመኖራቸውን የአካባቢ እና ባዮሎጂካል ናሙናዎችን ለመመርመር ይጠቅማል። እንደ ፋርማሲዩቲካል፣ አካባቢ፣ ፎረንሲክስ እና ኬሚካሎች ባሉ የተለያዩ ኢንዱስትሪዎች ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል።
በFPLC እና HPLC መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድን ናቸው?
- FPLC እና HPLC የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ዓይነቶች ናቸው።
- ሁለቱም ባዮሎጂያዊ ናሙናዎችን ለመለየት እና ለመለየት ያገለግላሉ።
- ፈሳሽ የሞባይል ደረጃ እና ጠንካራ የማይንቀሳቀስ ደረጃ አላቸው።
- ሁለቱም ቴክኒኮች ናሙናውን ለማለፍ አንድ አምድ ይጠቀማሉ።
- እነዚህ ቴክኒኮች ፓምፖችን፣ መመርመሪያዎችን፣ ቫልቮችን እና ሶፍትዌሮችን ለናሙና መለያየት እና ማወቂያ ይጠቀማሉ።
በFPLC እና HPLC መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
FPLC እንደ ፕሮቲኖች፣ ኑክሊዮታይድ እና peptides ያሉ ትላልቅ ባዮሞለኪውሎችን ለማጣራት የሚያገለግል ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ አይነት ነው።HPLC አነስተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ውህዶችን ለመለየት የሚያገለግል ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ዓይነት ነው። ስለዚህ፣ ይህ በFPLC እና HPLC መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። ከዚህም በላይ FPLC ፒኤች እና የኮንዳክሽን ተቆጣጣሪዎች እንዲሁም ክፍልፋይ ሰብሳቢዎችን ይጠቀማል። በአንጻሩ ኤች.ፒ.ኤል.ሲ ፒኤች እና ኮንዳክቲቭ ተቆጣጣሪዎችን እና ክፍልፋይ ሰብሳቢዎችን አይጠቀምም።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በ FPLC እና HPLC መካከል በሰንጠረዥ መልኩ ተጨማሪ ልዩነቶችን ይዘረዝራል።
ማጠቃለያ - FPLC vs HPLC
ክሮማቶግራፊ የላብራቶሪ ትንታኔ ቴክኒክ ሲሆን ክፍሎቹን ከውህድ ለመለየት የሚያገለግል ነው። እንደ አምድ ክሮማቶግራፊ፣ ጋዝ ክሮማቶግራፊ፣ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ፣ ion-exchange chromatography፣ ወዘተ ባሉ በርካታ ዓይነቶች ይከፈላል FPLC እና HPLC ሁለት አይነት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ናቸው። FPLC እንደ ፕሮቲኖች፣ ኑክሊዮታይድ እና peptides ያሉ ትላልቅ ባዮሞለኪውሎችን ለማጣራት የሚያገለግል ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ዓይነት ነው። በሌላ በኩል, HPLC አነስተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ውህዶችን ለመለየት የሚያገለግል ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ዓይነት ነው.ስለዚህ፣ ይህ በFPLC እና HPLC መካከል ያለው ልዩነት ምንድነው ማጠቃለያ ነው።
