በአርፒ HPLC እና HIC መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት RP HPLC የበለጠ የዋልታ ሞባይል ደረጃ እና አነስተኛ የፖላር ቋሚ ደረጃን መጠቀሙ ነው። ሆኖም፣ ኤችአይሲ የሃይድሮፎቢክ ሞለኪውሎች ከእሱ ጋር እንዲጣበቁ የሚያስችል የሃይድሮፎቢክ ቋሚ ደረጃን ይጠቀማል።
Chromatography ድብልቅን ወደ ክፍሎቹ ለመለየት የሚረዳ የትንታኔ ዘዴ ነው። በመጀመሪያ, ናሙናውን ወደ መፍትሄ ለመለያየት መፍታት አለብን. ይህ የመፍትሄው ንጥረ ነገር ድብልቅ የሞባይል ደረጃ ይባላል. ከዚያም የሞባይል ደረጃው የማይንቀሳቀስ ደረጃ ተብሎ በሚጠራው ሌላ ቁሳቁስ ውስጥ ያልፋል. የማይንቀሳቀስ ደረጃ የአካል ክፍሎችን መለየት ይወስናል. መለያየት የሚከሰተው በተንቀሳቃሽ ደረጃ እና በቋሚ ደረጃ መካከል ያለውን ቁሳቁስ በመከፋፈል ምክንያት ነው።
RP HPLC ምንድን ነው?
አርፒ HPLC የሚለው ቃል የተገላቢጦሽ ደረጃ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ Chromatography ነው። እንደ ሃይድሮፎቢክነት በድብልቅ ውስጥ ያሉትን ክፍሎች መለየት ያካትታል. የሃይድሮፎቢክ ክፍሎች በተንቀሳቃሽ ስልክ ክፍል ውስጥ የሚገኙት የማይንቀሳቀሱ ሃይድሮፎቢክ ጅማቶች በማይንቀሳቀስ ደረጃ ላይ ሲሆኑ የሃይድሮፊሊክ አካላት ደግሞ ከቋሚው ክፍል ወለል ጋር ሳይጣበቁ በቋሚ ደረጃው ያልፋሉ።
ምስል 01፡ HPLC Apparatus
ከተጨማሪ፣ ይህ ዘዴ ከሌሎች ክሮማቶግራፊያዊ ቴክኒኮች ጋር ሲነጻጸር የበለጠ መባዛት አለው፣ እና ሰፊ ተፈጻሚነትንም ያሳያል። ስለዚህ ይህንን ዘዴ በሁሉም የ HPLC ዘዴዎች ከ 75% በላይ ላቦራቶሪዎች እንጠቀማለን. ብዙ ጊዜ፣ የውሃ ውህድ ውሃ ከተሳሳተ የዋልታ ኦርጋኒክ መሟሟት እንደ ተንቀሳቃሽ ደረጃ እንጠቀማለን።ስለዚህም የሃይድሮፎቢክ ክፍሎችን በመፍትሔው ውስጥ በቋሚ ደረጃው ወለል ላይ መያያዝን ያረጋግጣል።
HIC ምንድን ነው?
HIC የሚለው ቃል ሀይድሮፎቢክ መስተጋብር ክሮማቶግራፊን ያመለክታል። እሱ የተገላቢጦሽ ደረጃ HPLC ዓይነት ነው ፣ እና ይህ ዘዴ በዋነኝነት እንደ ፕሮቲኖች ያሉ ትላልቅ ባዮሞለኪውሎችን ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል። በዚህ ዘዴ የባዮሞለኪውልን ናሙና ለመሥራት የውሃ መካከለኛ መጠቀም አለብን. ኦርጋኒክ መሟሟት ፕሮቲኖችን መጨፍጨፍ ስለሚያስከትል ነው። ከዚህም በላይ ይህ ዘዴ በትላልቅ ሞለኪውሎች መካከል ያለውን የቋሚ ደረጃ በትንሹ ሃይድሮፎቢክ ወለል መካከል ያለውን መስተጋብር ይጠቀማል። በተጨማሪም, ፕሮቲን በማሸጊያው ላይ እንዲቆይ ስለሚያበረታታ በናሙናው ውስጥ ከፍተኛ የጨው ክምችት መጠቀም አለብን; ይህ ሂደት ጨው ማውጣት ይባላል. የጨው ክምችትን ቀስ በቀስ በመቀነስ፣ ባዮሞለኪውሎቹ እንደ ሀይድሮፎቢሲያቸው ተለይተው እንዲወጡ ማድረግ እንችላለን።
በተለምዶ ይህ ዘዴ ከ ion-exchange chromatography ተቃራኒ ሁኔታዎችን ይጠቀማል።በዚህ ዘዴ ውስጥ, በመጀመሪያ, በናሙናው ውስጥ ያለውን የሶሉቱን መፍትሄ ለመቀነስ በአምዱ ውስጥ የመጠባበቂያ መፍትሄን ማለፍ አለብን. የፕሮቲን ሃይድሮፎቢክ ክልሎች እንዲጋለጡ ያደርጋል. ይሁን እንጂ ሞለኪውሉ የበለጠ ሃይድሮፎቢክ በሚሆንበት ጊዜ ማሰሪያውን ለማራመድ አነስተኛ ጨው ያስፈልጋል. እዚህ፣ ያነሱ የሃይድሮፎቢክ ሶሉቶች መጀመሪያ ይለቃሉ፣ እና በጨው ክምችት ለውጥ መሰረት፣ ብዙ ሃይድሮፎቢክ ሶሉቶች በመጨረሻ ይገለላሉ።
በአርፒ HPLC እና HIC መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Chromatography በድብልቅ ውስጥ ያሉ ክፍሎችን የመለየት ትንተናዊ ዘዴ ነው። RP HPLC እና HIC ሁለት ልዩ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ናቸው። በ RP HPLC እና HIC መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት RP HPLC የበለጠ የዋልታ ሞባይል ደረጃ እና አነስተኛ የፖላ ቋሚ ደረጃን ሲጠቀም HIC ደግሞ ሃይድሮፎቢክ የማይንቀሳቀስ ደረጃን ይጠቀማል ይህም የሃይድሮፎቢክ ሞለኪውሎች በእሱ ላይ እንዲጣበቁ ያስችላቸዋል።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በRP HPLC እና HIC መካከል ያለውን ልዩነት ያጠቃልላል።
ማጠቃለያ - RP HPLC ከ HIC
Chromatography በድብልቅ ውስጥ ያሉ ክፍሎችን የመለየት ትንተናዊ ዘዴ ነው። RP HPLC እና HIC ሁለት ልዩ ክሮማቶግራፊ ቴክኒኮች ናቸው። በ RP HPLC እና HIC መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት RP HPLC የበለጠ የዋልታ ሞባይል ደረጃ እና አነስተኛ የፖላ ቋሚ ደረጃን ሲጠቀም HIC ደግሞ ሃይድሮፎቢክ የማይንቀሳቀስ ደረጃን ይጠቀማል ይህም የሃይድሮፎቢክ ሞለኪውሎች ከእሱ ጋር እንዲጣበቁ ያስችላቸዋል።
