በKlenow እና T4 DNA polymerase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የ Klenow ቁርጥራጭ የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ 1 ትልቅ ቁራጭ ሲሆን T4 DNA polymerase DNA polymerase 1 of bacteriophage T4 ነው።
ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎች ዲኦክሲራይቦኑክሊዮታይድን ወደ 3′-OH ጫፍ በመጨመር የዲኤንኤ መፈጠርን የሚያነቃቁ ኢንዛይሞች ናቸው። የተለያዩ የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴስ ዓይነቶች አሉ. በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉ አብዛኛዎቹ የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎች ፕሮካርዮቲክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴስ ናቸው። ክሌኖው ቁርጥራጭ እና T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴስ ፕሮካርዮቲክ መነሻ ያላቸው ሁለት ዓይነት የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎች ናቸው። ክሌኖው ቁርጥራጭ ከኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1 በባክቴሪያ ፕሮቲሊስ ሱቲሊሲን ወደ ሁለት ቁርጥራጮች። T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1 የባክቴሪዮፋጅ T4 ነው። ሁለቱም Klenow እና T4 DNA polymerase 5′ 3′ ፖሊሜሬሴ እና 3′→5′ exonuclease እንቅስቃሴ አላቸው። ሁለቱም 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴ የላቸውም፣ይህም ለሞለኪውላር ባዮሎጂ ለብዙ አፕሊኬሽኖች ይበልጥ ተስማሚ ያደርጋቸዋል።
ክሌኖው ምንድን ነው?
Klenow ቁርጥራጭ ለሞለኪውላር ባዮሎጂ ጠቃሚ የሆነ የDNA polymerase ነው። ኢ ኮላይ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1 በባክቴሪያ ፕሮቲዮቲክስ, ሳብቲሊሲን, ፕሮቲዮቲክስ መፈጨትን ሲያካሂድ, ሁለት ቁርጥራጮችን ያመጣል-አንደኛው ትልቅ ቁራጭ ነው, ሌላኛው ደግሞ ትንሽ ቁራጭ ነው. ክሌኖው ቁራጭ 68 ኪዳ የሆነ ትልቅ ቁራጭ ነው። የ Klenow ቁርጥራጭ 5′ የ Klenow ቁርጥራጭ 5′ → 3′ exonuclease እንቅስቃሴን አልያዘም ፣ ይህም በሙሉ ርዝመት ወይም ባልተነካ ኢ.coli DNA polymerase 1. የፖሊሜራይዜሽን እንቅስቃሴ ብቻ በሚያስፈልግበት ጊዜ ጠቃሚ ነው. የKlenow ፍርስራሾች 5’ overhangs ለመሙላት ጥቅም ላይ ይውላሉ፣የምርመራዎችን ውህደት፣ዲኤንኤ ቅደም ተከተል፣የድርብ-ፈትል ዲኤንኤ ውህደት፣የሲዲኤንኤ ሰከንድ ፈትል እና ሳይት-ዳይሬክት ሙታጄኔሲስ።
ሥዕል 01፡ Klenow ቁርጥራጭ
በተወሰኑ አፕሊኬሽኖች፣ 3′→5′ የKlenow ቁርጥራጭ የ exonuclease እንቅስቃሴ እንዲሁ የማይፈለግ ይሆናል። ለ Klenow ቁርጥራጭ ኮድ ወደሚያቀርበው ጂን ሚውቴሽን በማስተዋወቅ ሊወገድ ይችላል። የተገኘው የKlenow ቁርጥራጭ exo-Klenow ቁርጥራጭ በመባል ይታወቃል። ስለዚህ፣ exo-Klenow ቁርጥራጭ የE.coli polymerase 1. 5′→3′ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ ብቻ ነው ያለው።
T4 DNA Polymerase ምንድነው?
T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ የዲኤንኤ ውህደቱን የሚያስተካክል ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ነው።በ Bacteriophage T4 የተቀመጠ ፕሮቲን ነው። በመዋቅር፣ T4 DNA polymerase 898 የአሚኖ አሲድ ቀሪ ፕሮቲን ነው (የ103.6 ኪዳ ሞለኪውል ክብደት)። ውህደቱን ለማስተካከል አብነት እና ፕሪመር ያስፈልገዋል።
ምስል 02፡ T4 DNA Polymerase
ከክሌኖው ቁርጥራጭ ጋር ተመሳሳይ፣T4 DNA polymerase ሁለቱም 5′→3′ polymerase እና 3′→5′ exonuclease እንቅስቃሴዎች አሉት። ከዚህም በላይ 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴም የለውም። T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜዝ በ 5′ ወጣ ያሉ የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን ለመሙላት ጠቃሚ ነው። እንዲሁም ብዙ ጊዜ ለ 5′-መጨረሻ ወይም 3′-መጨረሻ-መለያ ድርብ-ፈትል ያለው ዲኤንኤ ጥቅም ላይ ይውላል። T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜዝ በተደጋጋሚ በብሎንት ክሎኒንግ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል. የT4 DNA polymerase 3′→5′ exonuclease (ማረም) እንቅስቃሴ ከKlenow ቁርጥራጭ የበለጠ ጠንካራ (ከ200 ጊዜ በላይ) ነው። በጣም አስፈላጊው ነገር, T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬዜሽን ከፍተኛ ፕሮሰስ (400 ኑክሊዮታይድ በሰከንድ) አለው.
በKlenow እና T4 DNA Polymerase መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድን ናቸው?
- Klenow እና T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴስ ሁለት ፕሮካርዮቲክ ፖሊመሬሴዎች ናቸው።
- ሁለቱም ፖሊመሬሴዎች 5′→3′ ፖሊሜሬዝ እና 3′→5′ exonuclease እንቅስቃሴ አላቸው።
- 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴን አያሳዩም።
- ሁለቱም ኢንዛይሞች የዲኤንኤ ውህደት ለመፍጠር አብነት እና ፕሪመር ያስፈልጋቸዋል።
- እነዚህ ኢንዛይሞች ሙቀት በ75 0 ላይ ሊነቃቁ ይችላሉ።
በKlenow እና T4 DNA Polymerase መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
በKlenow እና T4 DNA polymerase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የእያንዳንዱ ኢንዛይም መነሻ ነው። ክሌኖው ቁርጥራጭ ከባክቴሪያ የተገኘ ሲሆን T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ደግሞ ባክቴሪያ ከሆነው ባክቴሪያ የመጣ ነው። T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ከ Klenow ቁርጥራጭ የበለጠ ከፍተኛ ፕሮሰስ አለው። ከዚህም በላይ T4 DNA polymerase ከ Klenow ቁርጥራጭ ይልቅ ጠንካራ የማጣራት እንቅስቃሴ አለው.ስለዚህም ይህ በKlenow እና T4 DNA polymerase መካከል ያለው ሌላ ልዩነት ነው።
ከታች ያለው መረጃ ግራፊክ በKlenow እና T4 DNA polymerase መካከል በሠንጠረዡ መካከል ተጨማሪ ልዩነቶችን ይዘረዝራል።
ማጠቃለያ - Klenow vs T4 DNA Polymerase
Klenow ቁርጥራጭ የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1 ትልቅ ቁራጭ ነው። 5′→3′ ፖሊመሬሴ እና 3′→5′ exonuclease እንቅስቃሴዎች አሉት። ያልተነካ የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ፖል 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴ የለውም።ስለዚህ ክሌኖው ቁርጥራጭ የባክቴሪያ ፖሊመሬሴስ ነው። በሌላ በኩል, T4 ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ በባክቴሪዮፋጅ T4 የተቀመጠ ፖሊሜሬዝ ነው. ከ Klenow ቁርጥራጭ ጋር በሚመሳሰል መልኩ ሁለቱንም 5′→3′ ፖሊመሬሴ እና 3′→5′ exonuclease እንቅስቃሴዎችን ይይዛል፣እና 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴ የለውም። ነገር ግን፣ T4 DNA polymerase ከ Klenow ቁርጥራጭ ይልቅ ከፍተኛ የማጣራት ስራ እና ከፍተኛ የማጣራት ስራ አለው።ስለዚህ፣ ይህ በKlenow እና T4 DNA polymerase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
