በዕፅዋትና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት በእጽዋት ዲ ኤን ኤ ማውጣት በደረቅ በረዶ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ያለውን ቲሹ በመፍጨት የሕዋስ ግድግዳውን በመስበር በእንስሳት ዲ ኤን ኤ መውጣት ያስፈልጋል። የእንስሳት ህዋሶች የሕዋስ ግድግዳ ስለሌላቸው ይህን እርምጃ መፈጸም አስፈላጊ አይደለም::
ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ የዕፅዋትና የእንስሳት ሕዋሳት ጀነቲካዊ ቁሳቁስ ነው። ጄኖሚክ ዲ ኤን ኤ ለእያንዳንዱ ተክል ወይም እንስሳ ልዩ ነው። ጥሩ ጥራት ያለው ዲ ኤን ኤ ማውጣት ለሞለኪውላር ምርምር ቅድመ ሁኔታ ነው። የኦርጋኒክ ዲ ኤን ኤ የሚመረተው ለመለየት፣ በሽታዎችን ለይቶ ለማወቅ፣ የተለየ ጂኖች እና ቅደም ተከተሎችን ለመለየት፣ የፍትህ ዓላማዎች፣ የአባትነት ምርመራ፣ የጂኖም ቅደም ተከተል እና የመድኃኒት ልማት ወዘተ.የዲኤንኤ ማውጣት ዘዴ እንደየሴሎች አይነት ይለያያል - የእንስሳት ሕዋስም ይሁን የእፅዋት ሕዋስ።
የእፅዋት ዲኤንኤ ማውጣት ምንድነው?
DNA በእጽዋት ሴሎች ውስጥ የሚወጣ ለተለያዩ ሞለኪውላር ጥናቶች ነው። ያልተነካ፣ ንፁህ ጂኖሚክ ዲኤንኤ ለማውጣት ያስፈልጋል። ስለዚህ፣ ከእንስሳት ሴሎች ከዲኤንኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች የሚለያዩ የተለያዩ የዲኤንኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች አሉ። ምክንያቱም የእፅዋት ህዋሶች የሴሉላር ይዘቶችን ለማውጣት መሰበር ያለበት የሕዋስ ግድግዳ ስላላቸው ነው።
ማውጣቱ ብዙውን ጊዜ የእጽዋት ቲሹዎችን በደረቅ በረዶ ወይም ፈሳሽ ናይትሮጅን በመፍጨት በሞርታር እና በፔስትል በመጠቀም ነው። ከዚያም የሴል ሽፋኖች ተሰብረዋል, እና ሴሉላር ይዘቱ ወደ ኤክስትራክሽን ቋት ውስጥ ይወሰዳል. ይህ አብዛኛውን ጊዜ ሳሙና በመጠቀም ነው; ኤስ.ዲ.ኤስ (ሶዲየም ዶዴሲል ሰልፌት) ወይም ሲቲቢ (ሴቲልትሪሚልሚየም ብሮሚድ) ቋት። የተለቀቀው ዲ ኤን ኤ እንደ ኢዲቲኤ የመሰለ ቺሊንግ ኤጀንት በመጠቀም ከውስጣዊ ኒዩክለሴሶች የተጠበቀ ነው። ከዚህም በላይ ፕሮቲኖች ክሎሮፎርም ወይም ፌኖልን በመጠቀም ከዲኤንኤ ይለያሉ.
ስእል 01፡ የዕፅዋት ዲኤንኤ ማውጣት
እፅዋት ፍላቮኖይድ እና ሌሎች ሁለተኛ ደረጃ ሜታቦላይትን ጨምሮ ፖሊሳካርዳይድ እና ፖሊፊኖሎችን ያዋህዳሉ። እነዚህ ውህዶች የንፁህ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ለማውጣት ጣልቃ ይገባሉ. ስለዚህ፣ አብዛኛዎቹ የዕፅዋት ዲኤንኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች ሌላ እርምጃን ያካትታሉ፣ እንደ ሴሲየም ክሎራይድ ጥግግት ቀስ በቀስ እነዚህን ውህዶች ለማስወገድ።
አብዛኞቹ የዲኤንኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች ትኩስ የቅጠል ናሙናዎችን ለዲኤንኤ ማውጣት ይመክራሉ። አንዳንድ ዘዴዎች እንደ ፈሳሽ ናይትሮጅን እና ፊኖል ያሉ አደገኛ ኬሚካሎችን አያካትቱም. CTAB (Cetyl trimethylammonium bromide) ፕሮቶኮል ከፍተኛ ጥራት ያለው የእጽዋት ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ለማውጣት የሚያመች ታዋቂ የእፅዋት ዲ ኤን ኤ ማውጣት ፕሮቶኮል ነው። ለዕፅዋት ዲ ኤን ኤ ለማውጣት ቀላል፣ አስተማማኝ፣ አስተማማኝ እና ወጪ ቆጣቢ ዘዴ ነው።አብዛኛዎቹ ሌሎች ዘዴዎች የተሻሻሉ የ CTAB ዘዴ ስሪቶች ናቸው።
የእንስሳት ዲኤንኤ ማውጣት ምንድነው?
የእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት ለሞለኪውላር ትንተና ከእንስሳት ሴሎች ጂኖሚክ ዲኤንኤ ማውጣት ነው። ከእፅዋት ዲ ኤን ኤ ማውጣት በተለየ የእንስሳት ሕዋሳት የሕዋስ ግድግዳ ስለሌላቸው የሕዋስ ግድግዳ መፈራረስ አስፈላጊ አይሆንም። የደም ሴሎች ለተለያዩ ዓላማዎች የሚውሉ በጣም የተለመዱ የእንስሳት ሕዋሳት ናቸው።
ምስል 02፡ የዲኤንኤ ማውጣት
የፊኖል-ክሎሮፎርም ዘዴ ለደም ሴሎች ምርጥ ምርጫዎች አንዱ ነው። ዲ ኤን ኤ ከዚህ ዘዴ ሲወጣ የዲኤንኤ ምርት እና ጥራት ከፍተኛ ነው። ፈሳሽ-ፈሳሽ የዲ ኤን ኤ ማውጣት ፕሮቶኮል ነው, እና ይህ ዘዴ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎችን በማይታዩ መፍትሄዎች ውስጥ በሚሟሟቸው መሰረት ይለያል.ፌኖል፣ ክሎሮፎርም እና አይሶአሚል አልኮሆል የዚህ ዘዴ ቀዳሚዎቹ ሶስት ንጥረ ነገሮች ናቸው።
በዕፅዋት እና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- በእፅዋትም ሆነ በእንስሳት ዲኤንኤ በሚወጣበት ጊዜ የሕዋስ ሽፋኖች መበጥበጥ አለባቸው።
- ዲኤንኤው ከውስጣዊ ኒዩክሊዮስ ሊጠበቅ ይገባል።
- ከተጨማሪም የዲኤንኤ መቆራረጥ መከላከል አለበት።
- የእፅዋት ዲኤንኤ እና የእንስሳት ዲኤንኤ ለማውጣት የንግድ ዕቃዎች አሉ።
- አብዛኞቹ የዕፅዋት እና የእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት ዘዴዎች ቀጣይነት ያለው ማሻሻያ እና ደረጃ ማሻሻያ ያስፈልጋቸዋል።
በዕፅዋት እና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
በእፅዋት እና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የእፅዋት ዲ ኤን ኤ ማውጣት የሕዋስ ግድግዳውን ለመስበር በደረቅ በረዶ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ የእፅዋትን ቲሹ መፍጨት ስለሚፈልግ የእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት እንስሳት ስለሆኑ ይህንን እርምጃ አይጠይቅም ። ሴሎች የሕዋስ ግድግዳ የላቸውም.የ CTAB ዘዴ ለተክሎች ዲ ኤን ኤ ለማውጣት በጣም ጥሩ ከሆኑ ዘዴዎች አንዱ ሲሆን የ phenol-chloroform ዘዴ ደግሞ የእንስሳትን ዲኤንኤ ለማውጣት በጣም ጥሩ ከሆኑ ዘዴዎች ውስጥ አንዱ ነው።
ከታች የመረጃ ሥዕላዊ መግለጫዎች በዕፅዋት እና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለውን ልዩነት ያሳያል።
ማጠቃለያ - የእፅዋት vs የእንስሳት ዲኤንኤ ማውጣት
ዲኤንኤ ከተለያዩ የሕዋስ ዓይነቶች ለማውጣት የተለያዩ ዘዴዎች አሉ። ስለዚህ የእፅዋት ዲኤንኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች ከእንስሳት ሕዋስ ዲ ኤን ኤ ማውጣት ፕሮቶኮሎች ይለያያሉ። የእፅዋት ዲ ኤን ኤ ማውጣት የሕዋስ ግድግዳ ፣ የሕዋስ ሽፋን እና የኒውክሌር ሽፋን መቋረጥን የሚጠይቅ ሲሆን የእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት የሕዋስ ሽፋን እና የኑክሌር ሽፋን መበላሸትን ይጠይቃል። ከሁሉም በላይ የእንስሳት ሴል ዲ ኤን ኤ ማውጣት በደረቅ በረዶ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በመፍጨት የሕዋስ ግድግዳዎች መቋረጥ አያስፈልገውም.ስለዚህም በእጽዋት እና በእንስሳት ዲ ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ይህ ነው።
