በ sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት በ sucrose gradient ultracentrifugation ውስጥ ቀጣይነት ያለው sucrose ቅልመት ጥቅም ላይ ይውላል፣ በ sucrose cushion ultracentrifugation ውስጥ ደግሞ የተቋረጠ sucrose ቅልመት ጥቅም ላይ ይውላል።
Sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation የተወሰኑ የማክሮ ሞለኪውል ዓይነቶችን ለመለየት የሚያገለግሉ ሁለት ተመሳሳይ ቴክኒኮች ናቸው። በሁለቱም ቴክኒኮች የሱክሮስ እፍጋታ ቅልመት ጥቅም ላይ ይውላል። ነገር ግን በ sucrose gradient ultracentrifugation ውስጥ፣ ተከታታይ ጥግግት ቅልመት ጥቅም ላይ ይውላል፣ በ sucrose cushion ultracentrifugation ውስጥ፣ የተቋረጠ ጥግግት ቅልመት ጥቅም ላይ ይውላል።
Sucrose Gradient Ultracentrifugation ምንድነው?
Sucrose gradient ultracentrifugation እንደ ዲ ኤን ኤ፣ አር ኤን ኤ እና ፕሮቲኖች ያሉ ማክሮ ሞለኪውሎችን ለመከፋፈል የሚያገለግል ዘዴ ነው። በዚህ ዘዴ ውስጥ በርካታ ደረጃዎች አሉ. እነሱም sucrose gradient ዝግጅት, centrifugation, መለያየት እና elution. ቀስ በቀስ ዝግጅት በዚህ ዘዴ ውስጥ ዋናው እርምጃ ነው. በዚህ ቴክኒክ ውስጥ የተለያዩ መጠን ያላቸው ማክሮ ሞለኪውሎች ያለው ናሙና በሱክሮስ ግራዲየንት አምድ ላይ ተዘርግቷል። ሴንትሪፉል በሚደረግበት ጊዜ የተለያየ መጠን ያላቸው ማክሮ ሞለኪውሎች በሱክሮስ ቅልመት አምድ በኩል በተለያየ መጠን ይሞላሉ። Sedimentation centrifugation ኃይል, መጠን ቅርጽ እና macromolecules መካከል ጥግግት, ጥግግት እና ቅልመት viscosity ጨምሮ, በተለያዩ ነገሮች ላይ ይወሰናል. በሴንትሪፉጅሽን መጨረሻ ላይ ማክሮ ሞለኪውሎች በጥቅጥቅ ሁኔታ ይለያያሉ. ትላልቅ ማክሮ ሞለኪውሎች (ከፍተኛ-ጥቅጥቅ ያሉ ማክሮ ሞለኪውሎች) ደለል ወደ ታች። ቀለል ያሉ (ዝቅተኛ- density macromolecules) በግራዲየኑ አናት ላይ ይቀራሉ።ስለዚህ, ሞለኪውሎቹ እንደ የተለያዩ ባንዶች ይለያሉ. ከዚያ ባንዶቹ መለያየት አለባቸው እና የተለየውን ማክሮ ሞለኪውል ከሱክሮስ የማጥራት ሥራ መደረግ አለበት።
ምስል 01፡ Sucrose Gradient Ultracentrifugation
በመተግበሪያው በኩል ይህ ዘዴ ለዲኤንኤ ሞለኪውሎች ክፍልፋይ በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። የሱክሮስ ግራዲየንት ultracentrifugation በተለምዶ የፕሮቲን ውስብስብ መጠን እና ስብጥርን ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል። በተጨማሪም ይህ ዘዴ mRNAን በከፊል ለማጣራት ያገለግላል።
Sucrose Cushion Ultracentrifugation ምንድነው?
Sucrose cushion ultracentrifugation ሌላው የማክሮ ሞለኪውሎችን ክፍልፋይ እንዲከፋፍል የሚያስችል ዘዴ ነው። እንደ sucrose density ቅልመት ultracentrifugation ሳይሆን፣ sucrose cushion ultracentrifugation የተቋረጠ ጥግግት ቅልመትን ይጠቀማል።በተለዩ ደረጃዎች የሱክሮስ ክምችት ከላይ ወደ ታች ይጨምራል. በዚህ ቴክኒክ ውስጥ መለያየት የሚከናወነው በሴንትሪፉጅ ቱቦ ውስጥ የሱክሮስ ትራስ ተብሎ የሚጠራውን የሱክሮስ መፍትሄ በትንሽ መጠን ላይ በማስቀመጥ ነው። ይህ በከፍተኛ ፍጥነት ሴንትሪፍግሽን ውስጥ የተሻለ መለያየትን ያስችላል። ሞለኪውሎቹ በሱክሮስ ትራስ መካከል እንደ ባንድ ሲለያዩ ነጭው ባንድ ሊሰበሰብ እና ሊጸዳ ይችላል። ከዚህም በላይ የሱክሮስ ትራስ ዘዴን በመጠቀም ቆሻሻዎችን የበለጠ ማስወገድ ይቻላል. የሱክሮስ ትራስ ዘዴ ከ60-70% የሚሆነውን ቱቦ በናሙናው መሙላት ያስችላል። ስለዚህ የሱክሮስ ትራስ ዘዴ ከፍተኛ መጠን ያለው ናሙና እንዲሰራ ያስችለዋል።
በSucrose Gradient እና Sucrose Cushion Ultracentrifugation መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- Sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation የማክሮ ሞለኪውሎች ድብልቅን ለመለየት የሚያገለግሉ ሁለት ቴክኒኮች ናቸው።
- በሁለቱም ዘዴዎች፣ sucrose gradient ጥቅም ላይ ይውላል።
- ሴንትሪፍግሽን በሁለቱም ዘዴዎች አንድ እርምጃ ነው።
- የሞለኪውሎቹ ደለል እንደ ባንድ ወይም ዞን በእያንዳንዱ ዘዴ።
በSucrose Gradient እና Sucrose Cushion Ultracentrifugation መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Sucrose gradient ultracentrifugation በሴንትሪፉጅ ቱቦ ውስጥ ቀጣይነት ያለው የሱክሮስ ቅልመት የሚጠቀም ቴክኒክ ሲሆን sucrose cushion ultracentrifugation ደግሞ የተቋረጠ የ sucrose ቅልመትን የሚጠቀም ዘዴ ነው። ስለዚህ፣ ይህ በ sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
ከተጨማሪ፣ sucrose cushion ultracentrifugation ከፍተኛ መጠን ያለው የናሙና መጠን እንዲሰራ ያስችለዋል፣ሱክሮስ ግራዲየንት አልትራሴንትሪፍጋሽን ደግሞ በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ የናሙና መጠን እንዲሰራ ያስችላል።
ከኢንፎግራፊክ በታች ባለው ሠንጠረዥ በ sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation መካከል ያለውን ልዩነት ያሳያል።
ማጠቃለያ – Sucrose Gradient vs Sucrose Cushion Ultracentrifugation
Sucrose gradient ultracentrifugation ቀጣይነት ያለው sucrose ቅልመትን በመጠቀም ማክሮ ሞለኪውሎችን ይለያል። በአንፃሩ፣ sucrose cushion ultracentrifugation በድብልቅ ውስጥ ያሉ የተወሰኑ ቅንጣቶችን ለመለየት የተቋረጠ የ sucrose ቅልመትን ይጠቀማል። ስለዚህ፣ ይህ በ sucrose gradient እና sucrose cushion ultracentrifugation መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። የሱክሮስ ትራስ ዘዴ ሞለኪውሎችን ወደ ቱቦው ግርጌ ከሚፈጭ እንደ sucrose gradient ultracentrifugation በተለየ ሜካኒካዊ ጭንቀት ስለሌለው በስነ-ቅርጽ ያልተነኩ ቅንጣቶችን ለመሰብሰብ ያስችላል። ከዚህም በላይ የሱክሮስ ትራስ አልትራሴንትሪፍጋሽን ከሱክሮስ ግሬዲየንት አልትራሴንትሪፍጋሽን የበለጠ የናሙናውን መጠን እንዲሰራ ያስችለዋል።
