በኒክ ትርጉም እና መጨረሻ ሙሌት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የኒክ ትርጉም ለተለያዩ የተዳቀሉ ምላሾች ምልክት የተደረገባቸው የDNA መመርመሪያዎችን የሚፈጥር ሂደት ሲሆን መጨረሻው መሙላት ደግሞ ኑክሊዮታይድን ወደ ነጠላ-ገመድ መደራረብ በማከል የተደበላለቁ ቁርጥራጮችን የሚፈጥር ዘዴ ነው።
Nick ትርጉም እና መጨረሻ መሙላት በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ሁለት ቴክኒኮች ናቸው። የኒክ ትርጉም የተወሰኑ የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተሎችን ለማወቅ ለመዳቀል መመርመሪያዎችን ለመሰየም ያገለግላል። የጫፍ መሙላት ነጠላ-ገመድ ባለ ማንጠልጠያ ጫፋቸው የተጣበቁ ድፍርስ ቁርጥራጮችን ለመሥራት ይጠቅማል። ሁለቱም ቴክኒኮች ትልቅ ጠቀሜታ አላቸው, እና በመደበኛነት በሞለኪውላዊ ምርምር ቤተ-ሙከራዎች ውስጥ ይከናወናሉ.
የኒክ ትርጉም ምንድን ነው?
Nick ትርጉም ለተለያዩ ሞለኪውላር ባዮሎጂካል ቴክኒኮች እንደ መጥፋት፣በቦታ ማዳቀል፣ፍሎረሰንት ኢን ሲቱ ማዳቀል፣ወዘተ ምልክት የተደረገባቸው መመርመሪያዎችን ለማዘጋጀት የሚያገለግል ጠቃሚ ቴክኒክ ነው። የዲኤንኤ ምርመራዎች የተወሰኑ የዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ቅደም ተከተሎችን ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላሉ. በተሰየመ መፈተሻ እርዳታ የተወሰኑ ቁርጥራጮች ከተወሳሰበ የኑክሊክ አሲድ ድብልቅ ምልክት ሊደረግባቸው ወይም ሊታዩ ይችላሉ። ስለዚህ ምልክት የተደረገባቸው መመርመሪያዎች የተለያዩ ቴክኒኮችን በመጠቀም ይዘጋጃሉ. የኒክ ትርጉም በዲናሴ 1 እና በዲኤንኤ ፖሊመሬሴ 1 ኢንዛይሞች እገዛ ምልክት የተደረገባቸው መመርመሪያዎችን ከሚያመርት ዘዴ አንዱ ነው።
ስእል 01፡ የኒክ ትርጉም
Nick የትርጉም ሂደት የሚጀምረው በDNase 1 ኢንዛይም እንቅስቃሴ ነው።ዲናሴ 1 በኑክሊዮታይድ መካከል ያለውን የፎስፎዲስተር ቦንዶችን በማቋረጥ ወደ ፎስፌት የጀርባ አጥንት ድርብ-ክር ያለው ዲኤንኤ ያስተዋውቃል። ኒክ አንዴ ከተፈጠረ ነፃ 3′ OH ቡድን ኑክሊዮታይድ ይዘጋጃል፣ እና የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ 1 ኢንዛይም በላዩ ላይ ይሠራል። ከ5′ እስከ 3′ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ 1 ኤክሰኑክለስ እንቅስቃሴ ኑክሊዮታይድን ከኒክ ወደ 3′ አቅጣጫ ወደ የዲኤንኤ መስመር አቅጣጫ ያስወግዳል።
በአንድ ጊዜ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ 1 ኢንዛይም ፖሊሜሬሴ እንቅስቃሴ ይሰራል እና የተወገዱ ኑክሊዮታይዶችን ለመተካት ኑክሊዮታይድ ይጨምራል። ኑክሊዮታይዶች ከተሰየሙ, ተተኪው በተሰየሙት ኑክሊዮታይዶች ይከሰታል, እና ለመለየት ዲ ኤን ኤ ላይ ምልክት ያደርጋል. በመጨረሻም፣ ይህ አዲስ የተቀናጀ መለያ ያለው ዲ ኤን ኤ ለተለያዩ የማዳቀል ምላሾች እንደ መመርመሪያ ሊያገለግል ይችላል።
የመጨረሻ መሙላት ምንድነው?
የመጨረሻ ሙሌት በሞለኪውላር ባዮሎጂ የተደበደቡ ቁርጥራጮችን ለመስራት የሚያገለግል ዘዴ ነው። የምግብ መፈጨትን መገደብ ከመጠን በላይ የተንጠለጠሉ ቁርጥራጮችን ይፈጥራል። እነዚህ ቁርጥራጮች ወደ ፕላዝሚድ ቬክተሮች ለመገጣጠም ተኳሃኝ ላይሆኑ ይችላሉ።ተኳኋኝ ያልሆኑ ጫፎች እንዲቀላቀሉ ለማድረግ ቬክተሮች ብዙ ጊዜ ይደበዝዛሉ። ስለዚህ ኑክሊዮታይዶችን ወደ ተጨማሪው ፈትል በማከል ከመጠን በላይ የተንጠለጠሉ ቁርጥራጮችን ለፖሊሜራይዜሽን አብነት በመጠቀም መደብዘዝ ይችላሉ። ይህ ሂደት መጨረሻ መሙላት በመባል ይታወቃል።
ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎች እንደ Klenow የDNA Polymerase I እና T4 DNA Polymerase ቁርጥራጭ የመጨረሻውን ሙሌት ያመርቱታል። ለመሙላት (5′ → 3′) እና መልሶ ማኘክ (3′ → 5′) ኑክሊዮታይድን ይጨምራሉ። የተጣበቁ ጫፎች አንዴ ከሞሉ በኋላ ደብዝዘዋል፣ እና ወደ ቬክተር ለመግባት ዝግጁ ይሆናሉ።
ከዚህም በተጨማሪ የዲኤንኤ ሞለኪውሎችን ለመሰየም የመጨረሻ ሙሌት መጠቀም ይቻላል። ይሁን እንጂ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎችን በሚጣበቁ ጫፎች ለመሰየም ብቻ ሊያገለግል ይችላል። ከኒክ ትርጉም ጋር ሲነፃፀር፣ መጨረሻ መሙላት ረጋ ያለ ዘዴ ሲሆን ይህም አልፎ አልፎ የዲ ኤን ኤ መቆራረጥን አያመጣም።
በኒክ ትርጉም እና መሙላት መጨረሻ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ሁለቱም የኒክ ትርጉም እና መጨረሻ መሙላት ሞለኪውላር ባዮሎጂያዊ ቴክኒኮች ናቸው።
- መመርመሪያዎችን ለመሰየም ሊያገለግሉ ይችላሉ።
- ሁለቱም በብልቃጥ ውስጥ ናቸው
በኒክ ትርጉም እና መሙላት መጨረሻ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
Nick ትርጉም ለማዳቀል ምልክት የተደረገባቸው መመርመሪያዎችን የሚፈጥር ዘዴ ነው። በአንፃሩ፣ የመጨረሻ ሙሌት ወደ ቬክተር የሚገቡ ጥርት ያሉ ቁርጥራጮችን የሚፈጥር ዘዴ ነው። ስለዚህ፣ ይህ በኒክ ትርጉም እና በመጨረሻው መሙላት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። በተጨማሪም የኒክ ትርጉም ከ5'to 3′ exonuclease እንቅስቃሴን መጠቀምን የሚጠይቅ ሲሆን መጨረሻ መሙላት ደግሞ ከ5'እስከ 3′ exonuclease እንቅስቃሴን አይጠይቅም።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በኒክ ትርጉም እና በመሙላት መካከል ያለውን ልዩነት በበለጠ ዝርዝር ያሳያል።
ማጠቃለያ - የኒክ ትርጉም vs መሙላት መጨረሻ
Nick ትርጉም ራዲዮ ምልክት የተደረገባቸውን ኑክሊዮታይዶችን ወደ ዲ ኤን ኤ ውስጥ የሚያካትት ዘዴ ነው። በDNase 1 እና E.coli DNA polymerase 1 ኢንዛይሞች እንቅስቃሴ ላይ በመመስረት የተሰየሙ መመርመሪያዎችን ያዋህዳል። በሌላ በኩል የጨረራ መሙላት ጠፍጣፋ ቁርጥራጮችን የሚያመርት ዘዴ ነው. ቁርጥራጮቹ የሚጣበቁ ጫፎች ሲኖራቸው (በነጠላ የተንጠለጠሉ መደራረብ) ወደ ቬክተሮች ለመገጣጠም ጠፍጣፋ ጫፎች ማድረግ አስፈላጊ ነው. የመጨረሻ ሙሌት ተኳኋኝ ኑክሊዮታይድን ይጨምራል እና ለሊጅሽን ተስማሚ ለማድረግ ጠፍጣፋ የመጨረሻ ቁርጥራጮችን ይፈጥራል። ስለዚህ፣ ይህ በኒክ ትርጉም እና በመጨረሻ መሙላት መካከል ያለውን ልዩነት ያጠቃልላል።
