የቁልፍ ልዩነት - ወደፊት vs ተቃራኒ ፕሪመር
Polymerase chain reaction (PCR) በሞለኪውላር ባዮሎጂካል አፕሊኬሽኖች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውል የዲኤንኤ ማጉያ ዘዴ ነው። በተለይ ፍላጎት ያለው የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል በሚሊዮኖች እና በቢሊዮን የሚቆጠሩ ቅጂዎችን የሚያደርግ በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውል ቴክኒክ ነው። በቤተ ሙከራ ውስጥ የሚሠራ የ in vitro ዘዴ ነው። PCR ቴክኒክ ሙሉ በሙሉ የተመካው በንግድ በተመረተው ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴስ Taq polymerase ላይ ነው። እንዲሁም ሌሎች በርካታ ክፍሎች እና ትክክለኛ የሙቀት ጥገና ያስፈልገዋል. አንድ አስፈላጊ ንጥረ ነገር ፕሪመር ነው. ፕሪመርስ ለታላሚው ዲኤንኤ ቅደም ተከተል የተነደፉ አጭር የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎች ናቸው።ብዙውን ጊዜ ርዝመታቸው ወደ 20 ኑክሊዮታይድ ነው. ታክ ፖሊሜሬዝ የኑክሊዮታይድ መጨመርን ወደ ቀድሞ ኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል ያዘጋጃል። ስለዚህ ፕሪመር የአዳዲስ ክሮች ውህደት እንደ መነሻ ሆነው ያገለግላሉ። Taq polymerase የሚሠራው ከ 5' እስከ 3' አቅጣጫ ብቻ ነው ስለዚህ የዲ ኤን ኤ ውህደት የሚከሰተው በተመሳሳይ ከ5' እስከ 3' አቅጣጫ ነው። ዲ ኤን ኤ ባለ ሁለት መስመር ስለሆነ በ PCR ውስጥ ሁለት ዓይነት ፕሪመርቶች ያስፈልጋሉ. ወደፊት ፕሪመር እና ተገላቢጦሽ ፕሪመር በመባል ይታወቃሉ። የዲ ኤን ኤ ውህደት በሚፈጠርበት ጊዜ በዲ ኤን ኤ ውስጥ የፕሪመር ማራዘሚያ አቅጣጫ ላይ ተመስርተው ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕሪመርስ ይባላሉ. ወደ ፊት ፕሪመር አንቲሴንስ ዲ ኤን ኤ ፈትል ያጠራል እና የጂን + ve strand ውህደት ወደ 5' ወደ 3' አቅጣጫ ይጀምራል። ከስሜት ግርዶሽ ጋር የተገላቢጦሽ ፕራይመር አኒልስ እና የኮዲንግ ፈትል ተጓዳኝ ፈትል ውህደትን ይጀምራል። ይህም -ve የጂን ፈትል ወደ 5'to 3' አቅጣጫ. ይህ ወደፊት እና በተገላቢጦሽ ፕሪመር መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
የፊት ፕራይመር ምንድን ነው?
ወደ ፊት አቀማመጥ የኮዲንግ ፈትል ወይም የጂን ስሜት ፈትል ውህደት ነው። ታክ ፖሊሜሬዝ ከ5’ እስከ 3’ አቅጣጫ ያለውን አዲስ ፈትል ውህደቱን ይቆጣጠራል። የኮዲንግ ስትራንድ ውህደቱ የሚከሰተው ፕሪመር በኮድ አልባው ወይም አንቲሴንስ ክር ሲሰርዝ እና በ5' ወደ 3' አቅጣጫ ሲረዝም ነው።
ሥዕል 01፡ ወደፊት እና ወደ ኋላ ተገላቢጦሽ
በአንቲሴንስ ፈትል ወይም በኮድ አልባው ወይም የአብነት ፈትል የሚሰርዘው ፕሪመር ወደፊት ፕሪመር በመባል ይታወቃል ምክንያቱም ወደፊት ፕሪመር ለኮዲንግ ውህደት ወይም ለጂን አወንታዊ ፈትል እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። ወደፊት ፕሪመር ከ 3' ጎን አንቲሴንስ ክር ጫፍ ጋር የሚደጋገፍ አጭር የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል አለው። ከፀረ-ሴንስ ክር ጋር ያዳቅላል እና ታክ ፖሊሜሬዝ ከአብነት ገመዱ ጋር ተጨማሪ ኑክሊዮታይድ እንዲጨምር ያመቻቻል።
Reverse Primer ምንድን ነው?
የተገላቢጦሽ ፕሪመር በ 3' ጫፍ የስሜት ህዋሳት ወይም በኮድ ገመዱ የሚደመስሰው አጭር የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ነው። የተገላቢጦሽ ፕሪመር የኮዲንግ ቅደም ተከተል ወይም ያለኮድ ቅደም ተከተል ተጨማሪ ፈትል ለማዋሃድ እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። የተገላቢጦሽ ፕሪመር ከኮዲንግ ገመዱ 3' ጫፍ ጋር ማሟያ የተነደፈ ነው። ስለዚህ፣ ከባለ 3' ጫፍ ጋር የኮዲንግ ገመዱን ያጠፋል እና Taq polymerase የፀረ ስሜት ፈትሹን ወይም የአብነት ገመዱን እንዲፈጥር ያስችለዋል። አቅጣጫው በተገላቢጦሽ ስለሆነ ይህ ፕሪመር በግልባጭ ፕሪመር ተብሎ ተሰይሟል።
ሁለቱም የተገላቢጦሽ እና ወደፊት ፕሪመርዎች ከሚሊዮኖች እስከ ቢሊየን የሚቆጠሩ የተወሰኑ የዲኤንኤ ክልሎች ኢላማ ወይም ፍላጎት ያላቸው ቅጂዎችን ለማምረት አስፈላጊ ናቸው።
በፊት እና በተገላቢጦሽ ፕራይመር መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድናቸው?
- ሁለቱም የፊት እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር ከ oligonucleotides የተሰሩ ናቸው።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች ከዲኤንኤ ድርብ ሰንሰለቶች ጎን ለጎን የሚደጋገፉ አጭር የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል አላቸው።
- ሁለቱም የፊት እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር ብዙውን ጊዜ 20 ኑክሊዮታይዶችን ይይዛሉ።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች በ polymerase chain reactions ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች ለንግድ የተዋሃዱ ናቸው።
- ሁለቱም የፊት እና የተገላቢጦሽ ፕሪመርሮች የሙቀት መጠን የተረጋጉ ናቸው እና በተለምዶ ተመሳሳይ Tm አላቸው።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች በዒላማው የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎች ተሰርዘዋል።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች የተነደፉት በ PCR ምላሽ መሰረት ነው።
- ሁለቱም ወደፊት እና ተገላቢጦሽ ፕራይመሮች ለዲኤንኤ ማጉላት እንደ መነሻ ሆነው ያገለግላሉ።
- ሁለቱም የተገላቢጦሽ እና ወደፊት ፕሪመርስ የተወሰኑ የታለሙ ወይም ፍላጎት ያላቸው የDNA ቅደም ተከተሎችን በሚሊዮን ቅጂዎች ለማምረት አስፈላጊ ናቸው።
በፊት እና በተገላቢጦሽ ፕሪመር መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ወደፊት ፕሪመር vs ተገላቢጦሽ |
|
| የማስተላለፍ ፕሪመር አጭር የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል ነው ከ 3’ ጫፍ ከሌለው ኮድ ወይም ከጂን የአብነት ፈትል ጋር የሚያዳቅለው እና የኮድ ቅደም ተከተሎችን ለማዋሃድ እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። | ተገላቢጦሽ ፕሪመር በኮድ 3' ጫፍ ወይም በኮድ ላልሆነው ፈትል የሚያዳቅለው አጭር የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ነው እና ኮድ አልባውን ቅደም ተከተል ለማዋሃድ እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። |
| አኔሊንግ ስትራንድ | |
| አስተላልፍ የፕሪመር መግለጫዎች ከአብነት ክር ጋር። | የፕራይመር መግለጫዎችን ከአብነት ባልሆነ ፈትል ጋር። |
| የወጣ አዲስ ቅደም ተከተል | |
| ወደ ፊት ፕሪመር የኮድ ቅደም ተከተል ውህደትን ያመቻቻል። | የተገላቢጦሽ ፕሪመር ያለኮድ ቅደም ተከተል ውህደትን ያመቻቻል። |
ማጠቃለያ - ወደፊት vs ተቃራኒ ፕሪመር
በ PCR ቴክኒክ ውስጥ የሚሳተፉ ሁለት አይነት ፕሪመርሮች አሉ። እነሱ ወደ ፊት እና ወደ ኋላ የሚመለሱ ናቸው. በአዲሱ የDNA strand ውህድ የፕሪመር ማራዘሚያ ላይ በመመስረት፣ እነዚህ ፕሪመርሮች የተሰየሙ ወይም የተሰየሙ ናቸው። Taq polymerase አዲሱን ዲኤንኤ በ5' እስከ 3' አቅጣጫ ያዋህዳል። ስለዚህ፣ ፕሪመርስ የተነደፉት ከድርብ ክሮች 3' ጫፎች ጋር እንደ ማሟያ ነው። በ5' እስከ 3' አቅጣጫ የሚያራዝመው ወደፊት ፕሪመር ከ 3' አንቲሴንስ መጨረሻ ወይም አብነት ወይም ኮድ አልባ ቅደም ተከተል ጋር ያዳቅላል። የኮድ ቅደም ተከተል ለማቀናጀት እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። በ 5' ወደ 3' አቅጣጫ የሚረዝመው የተገላቢጦሽ ፕሪመር በኮድ 3' ጫፍ ወይም በአንቴምፕሌት ወይም በስሜት ገመዱ ያዳቅላል።ያለኮድ ቅደም ተከተል ለማቀናጀት እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። ይህ ወደፊት እና በተገላቢጦሽ ፕሪመር መካከል ያለው ልዩነት ነው።
