በ PCR ፕሪመርሮች እና በቅደም ተከተል ፕሪመር መካከል ያለው ልዩነት

2024 ደራሲ ደራሲ: Alex Aldridge | [email protected]. ለመጨረሻ ጊዜ የተሻሻለው: 2023-12-17 13:31

ቁልፍ ልዩነት - PCR Primers vs Sequencing Primers

በቅርብ ጊዜ በሞለኪውላር ባዮሎጂ መስክ በተከሰቱት ለውጦች የተለያዩ የዝርያ መንገዶችን የምርመራ ሂደቶች ቀላል እና ትክክለኛ እንዲሆኑ የተለያዩ የዘረመል ቴክኒኮች ተዘጋጅተዋል። PCR እና ሌሎች ቅደም ተከተሎች ሁለት አስፈላጊ ዘዴዎች ናቸው. የተለያዩ ንዑስ ክፍሎችን ይጠቀማሉ. ፕሪመርስ ለሁለቱም PCR እና የሴኪውሲንግ ቴክኒኮች የተለመደ ዋና ንዑስ አካል ተደርገው ይወሰዳሉ። ፒሲአር ፕሪመርስ ለአንድ የተወሰነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ለማጉላት ጥቅም ላይ የሚውለው የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተሎችን ለመግለጥ በማሰብ የዲኤንኤ ክፍልፋዮችን በቅደም ተከተል በማዘጋጀት ሂደት ውስጥ ነው።ይህ በ PCR ፕሪመር እና በቅደም ተከተል ፕሪመር መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።

PCR Primers ምንድናቸው?

Polymerase Chain Reaction (PCR) የአንድ የተወሰነ ዲኤንኤ ክፍል አንድ ወይም ጥቂት ቅጂዎችን ለማጉላት እና ብዙ ሚሊዮን ተመሳሳይ ቅጂዎችን ለማግኘት በሞለኪውላር ባዮሎጂ መስክ ጥቅም ላይ የሚውል የዘረመል ቴክኒክ ነው። በ PCR ምላሽ፣ ፕሪመርን ጨምሮ የተለያዩ ክፍሎች ጥቅም ላይ ይውላሉ። ፕሪመርስ ከ18-25 የሆነ የኑክሊዮታይድ ርዝመት ያላቸው አጫጭር የዲ ኤን ኤ ክሮች ናቸው ይህም ከዲኤንኤ ቁርጥራጮች መጀመሪያ እና መጨረሻ አካባቢ ጋር የሚጣጣሙ ናቸው ። ፕሪመርስ ወደፊት ፕሪመር እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር ሊሆን ይችላል. እነዚህ ፕሪመርሮች ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን በሚያደርግበት ልዩ ቦታ ላይ ከዲኤንኤ ቁራጭ ጋር ይጣመራሉ እና በቦታው ላይ ካለው ልዩ ፕሪመር ጋር እንዲጣመሩ እና የአዲሱን የዲ ኤን ኤ ፈትል ውህደት ያስጀምራሉ።

የፕሪምሮች ምርጫ የ PCR ሂደት አስፈላጊ ገጽታ ነው። የፕሪሚየር ርዝመት ምርጫ አስፈላጊ ነው. ጥሩው ርዝመት 18-25 ኑክሊዮታይድ ይሆናል.ርዝመቱ በጣም አጭር ወይም በጣም ረጅም ከሆነ, ፕሪመርዎቹ በትክክል ለመጨመር ከዲኤንኤው ቅደም ተከተል ጋር አይጣመሩም. ርዝመታቸው በጣም አጭር የሆኑ ፕሪመርሮች በተለያዩ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ቦታዎች ላይ ወደማይታወቅ የፕሪመር መሰርሰር ያመራል።

ምስል 01፡ PCR Primers

የጉዋኒን እና ሳይቶሲን (ጂሲ) በጥሩ ፕሪመር ውስጥ ያለው ይዘት ከ40-60 ባለው ክልል ውስጥ መሆን አለበት። በ PCR ወቅት የፕሪመር ማስታገሻ ሙቀት እና የሟሟ ሙቀት ወሳኝ ነገሮች ናቸው. የማቅለጫው ሙቀት በትክክል ማስላት አለበት፣ እና የፕሪመር ማስታገሻ የሙቀት መጠኑ ከሟሟ የሙቀት መጠን 5 ^{0C ያነሰ መሆን አለበት። የማቅለጫው ሙቀት 60 ° ሴ እና 75 ° ሴ መሆን አለበት. በጣም ከፍተኛ ወይም በጣም ዝቅተኛ የአየር ሙቀት አነስተኛ ገቢር የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴን ያስከትላል።}

የቅደም ተከተል ፕሪመርስ ምንድናቸው?

የቅደም ተከተላቸው ፕሪመር የዲኤንኤ ቁርጥራጭን ልዩ ማንነቱን ለማሳየት በማሰብ በቅደም ተከተል አውድ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል። ጥሩ የቅደም ተከተል ውጤት ለማግኘት ከፍተኛ ጥራት ያላቸው ፕሪምፖች እና አብነቶች አስፈላጊ ናቸው። ስለዚህ, ፕሪመርሮች ሲመረጡ, ቅደም ተከተሎችን ወደምንፈልግበት የተወሰነ ክልል ልዩ መሆን አለባቸው. እንዲሁም ቅደም ተከተሎቹ ብዙውን ጊዜ ከ 3' እስከ 5' የፕሪሚየር ጫፎች በሚፈጠሩበት ትክክለኛ አቅጣጫ መሆን አለበት. ቅደም ተከተል የማይፈለግ ራስን ማዳቀል ለምሳሌ የፀጉር ማያያዣዎች መፈጠር አለበት. ተከታታይ የጓኒን መሰረቶችን መያዝ የለበትም።

የማቅለጫው ሙቀት (ቲኤም) ለቅደም ተከተል ሁኔታዎች ተስማሚ መሆን አለበት። ስለዚህ፣ በ52^oC እና በ74^{oC መካከል መሆን አለበት። የሚፈለገውን ቅደም ተከተል ሙሉ ርዝመት ለማግኘት እንደ ፕሪመር ጥቅም ላይ የሚውሉ ኦሊጎኑክሊዮቲዶችን ማዘጋጀት ማጽዳት አለበት. ኦሊጎኑክሊዮታይዶች ቆሻሻዎችን ከያዙ፣ የፕሪመር ቅደም ተከተል ምልክቱ ከተለያዩ የፕሪሚንግ ቦታዎች ይደራረባል፣ እና እንዲሁም የመሠረት ሴሎችን ብዛት ይቀንሳል።}

ምስል 02፡ ቅደም ተከተል ፕሪመርስ

የኦሊጎኑክሊዮታይድ የፕሪመር መቅለጥ ሙቀት (ቲኤም) የተጨማሪ የዲ ኤን ኤ ክሮች እርስበርስ ምን ያህል ጠንካራ እንደሆኑ ይወስናል። Tm በሁለቱም የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎች እና እንደ የጨው ክምችት ባሉ በርካታ ሁኔታዎች ላይ የሚመረኮዝ እንደ ቴርሞዳይናሚክስ ስሌት ተደርጎ ሊወሰድ ይችላል። የዲዲዮክሲኑክሊዮታይድ ቁርጥራጭ ቡድን ለማምረት የሳይክል ቅደም ተከተል ተብሎ የሚጠራው ልዩነት በ PCR ወቅት Tm አስፈላጊ ነው። እዚህ፣ በቅደም ተከተል የተቀመጠው ፕሪመር መጀመሪያ ላይ በአማራጭ ይሰረዛል፣ ከዚያም ይረዝማል እና በመጨረሻ ለማጉላት ይወገዳል። ስለዚህ የቲኤም ዋጋ በ52^oC እና 74^{o ሐ መካከል መሆን አለበት።የተቀነባበረ ኦሊጎኑክሊዮታይድ ከዲኤንኤ/ኤንኤን ሲንተሲስ ላቦራቶሪዎች ማግኘት ይቻላል። ምርጫ.ለዲኤንኤ ቅደም ተከተል ጥቅም ላይ የሚውለው አነስተኛ መጠን ያለው ውህደት አብዛኛውን ጊዜ 50 nmol ነው. እንዲሁም ከሁሉም በላይ ለቅደም ተከተል የሚያገለግሉ ፕሪመርሮች የጥራት ቅነሳውን ከሚከላከሉ ከብክሎች የፀዱ መሆን አለባቸው።}

በ PCR ፕራይመሮች እና በቅደም ተከተል ፕሪመርሮች መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?

• ሁለቱም PCR Primers እና Sequencing Primers በታለመው የዲኤንኤ ቅደም ተከተል በማጉላት ሂደት ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ፕሪመርሮች ናቸው።
• ሁለቱም PCR Primers እና Sequencing Primers በኑክሊዮታይድ የተዋቀሩ ናቸው።
• ሁለቱም PCR Primers እና Sequencing Primers አጭር ኦሊጎመሮች ናቸው።

በ PCR ፕሪመርሮች እና ተከታታይ ፕሪመርሮች መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?

PCR Primers vs Sequencing Primers
PCR primers ከ18-25 ኑክሊዮታይድ ተከታታይ ርዝመት ያላቸው አጫጭር የዲኤንኤ ክሮች ናቸው ይህም ከመጀመሪያዎቹ እና ከመጨረሻው የዲኤንኤ ክፍልፋዮች ጋር የሚስማማ ነው።	የቅደም ተከተላቸው ፕሪመር አጫጭር ኦሊጎመሮች ናቸው የዲኤንኤ ክፍልፋይ ቅደም ተከተል በማውጣት የተለየ ማንነቱን ለመግለጥ በማሰብ ነው።
ተግባር
PCR primers ለተወሰነ ዲኤንኤ ቅደም ተከተል ለማጉላት ጥቅም ላይ ይውላሉ።	የቅደም ተከተላቸው ፕሪመር የዲኤንኤ ክፍልፋዮችን ልዩ ማንነቱን ለማሳየት በማሰብ በቅደም ተከተል አውድ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ።
የሚያስፈልገው የፕሪም ብዛት
ሁለት ፕሪም; አንድ ወደፊት ፕሪመር እና አንድ ተገላቢጦሽ ፕሪመር እንደ PCR primers ጥቅም ላይ ይውላሉ።	እንደ ቅደም ተከተል ፕሪመር አንድ ፕሪመር ብቻ ያስፈልጋል።

ማጠቃለያ - PCR Primers vs Sequencing Primers

የቅደም ተከተላቸው ፕሪመር የዲኤንኤ ቁርጥራጭን ልዩ ማንነቱን ለማሳየት በማሰብ በቅደም ተከተል አውድ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል።ሂደቱን ለማስኬድ አንድ ተከታታይ ፕሪመር በቂ ይሆናል. ጥሩ የቅደም ተከተል ውጤቶችን ለማግኘት, ከፍተኛ ጥራት ያላቸው ፕሪሚኖች እና አብነቶች አስፈላጊ ናቸው. ስለዚህ, ፕሪመርሮች ሲመረጡ, ቅደም ተከተሎችን ወደምንፈልግበት የተወሰነ ክልል ልዩ መሆን አለባቸው. PCR ፕሪመርስ ከ18-25 የሆነ ኑክሊዮታይድ ርዝመት ያለው አጭር የዲኤንኤ ክሮች ናቸው ይህም ከዲኤንኤ ቁርጥራጮች መጀመሪያ እና መጨረሻ አካባቢ ጋር የሚስማማ ነው። PCR ፕሪመር ወደፊት ፕሪመር እና የተገላቢጦሽ ፕሪመር ሊሆን ይችላል። በጥሩ ፕሪመር ውስጥ ያለው የጓኒን እና ሳይቶሲን (ጂሲ) ይዘት ከ40-60 ባለው ክልል ውስጥ መሆን አለበት። በ PCR ወቅት የፕሪመር ማስታገሻ ሙቀት እና የሟሟ ሙቀት ወሳኝ ገጽታዎች ናቸው. ይህ በ PCR primers እና Sequencing primers መካከል ያለው ልዩነት ነው።