ቁልፍ ልዩነት - ዲ ኤን ኤ vs አር ኤን ኤ ማውጣት
የዲኤንኤ እና አር ኤን ኤ ጥናት የሞለኪውላር ባዮሎጂ፣ የባዮቴክኖሎጂ እና የጄኔቲክስ መሰረታዊ ፅንሰ ሀሳቦችን ለመረዳት ወሳኝ ገጽታዎች ናቸው። በእነዚህ ጥናቶች ውስጥ የሙከራ ሂደቶችን ለማካሄድ ንጹህ የዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ኤ ናሙናዎችን ማውጣት አስፈላጊ ነው. በዲኤንኤ እና በአር ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የዲ ኤን ኤ ማውጣት ሂደት ዲ ኤን ኤ ሲያጸዳ አር ኤን ኤ ማውጣት አር ኤን ኤ ሲያጠራ ነው። የዲኤንኤ የማውጣት ሂደት ሶስት የተለያዩ ደረጃዎች አሉት፡- የሴል ሊሲስ እና የሜምቦል ቅባቶች እና ፕሮቲኖች ካታቦሊዝም፣ በተጠናከረ የጨው መፍትሄ የካታቦላይትን መከማቸት እና የዲኤንኤ ዝናብ ከኤታኖል ጋር።የሶስት እርከን ሂደት ሁለት አማራጭ ደረጃዎችን ሊያካትት ይችላል. አር ኤን ኤ የማጥራት ሂደት አራት የተለያዩ ደረጃዎችን ያቀፈ ነው፡- የጓኒዲየም ቲዮሲያናት ለሴል ሊሲስ መጨመር፣ ፕሮቲን ዲንቱሬሽን ሪቦኑክሊየስን ጨምሮ፣ አር ኤን ኤ በክሎሮፎርም እና ፌኖል በመጨመር እና በኤታኖል በመጠቀም የዝናብ መጠንን መታጠብ።
የዲኤንኤ ማውጣት ምንድነው?
ዲኤንኤ ማውጣት አካላዊ እና ኬሚካላዊ ሂደት ነው ዲኤንኤን ከናሙና ለማጣራት የሚያገለግል። የዲኤንኤ ማውጣት በሞለኪውላር ባዮሎጂ እና በፎረንሲክ ሳይንስ አውድ ውስጥ አስፈላጊ ገጽታ ነው። ሂደቱ ሶስት መሰረታዊ ደረጃዎች አሉት. መጀመሪያ ላይ የፍላጎት ሴሎች መገኘት አለባቸው. በመቀጠልም የሕዋስ ሽፋንን ለመስበር ሴል ሊሲስ ይቀልጣል, ይህም ሴሉን ይከፍታል እና ሳይቶፕላዝምን ከዲ ኤን ኤ ጋር ያጋልጣል. ከሴሉ ሽፋን ላይ ያለውን ቅባት ለመቀባት Surfactants ወይም ሌሎች ሳሙናዎች ጥቅም ላይ ሊውሉ የሚችሉ ሲሆን አሁን ያሉት ፕሮቲኖች ደግሞ በፕሮቲሊስ ተበክለዋል። ይህ አማራጭ እርምጃ ነው። ሴሉ ከተቀባ በኋላ የካታቦልዝድ ሞለኪውሎችን መቆንጠጥ በተከማቸ የጨው መፍትሄዎች ይቀላል።በመቀጠልም የመፍትሄው ሴንትሪፍግሽን ሲሆን ይህም የቆሻሻ መጣያዎችን ከዲ ኤን ኤ ይለያል. በዚህ ደረጃ ፣የተለየው ዲ ኤን ኤ በሴል ዑደት ውስጥ ጥቅም ላይ ከሚውሉት ሬጀንቶች እና ጨዎች ጋር ይደባለቃል።
ምስል 01፡ ዲኤንኤ ማውጣት
የበለጠ ለማጣራት የሚከተሉትን ደረጃዎች መጠቀም ይቻላል። አንዱ ዘዴ የኤታኖል ዝናብ ሲሆን ይህም የበረዶ ቀዝቃዛ ኢታኖልን ከተለየ የዲ ኤን ኤ ናሙና ጋር መቀላቀልን ያካትታል. ዲ ኤን ኤ በአልኮል ውስጥ የማይሟሟ ሲሆን በዚህም ምክንያት የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች በአንድ ላይ በመዋሃድ ምክንያት እንክብሎችን ይፈጥራል። የ ion ጥንካሬን በመጨመር የዝናብ መጠንን ለመጨመር በዚህ ሂደት ውስጥ ሶዲየም አሲቴት ተጨምሯል. ከኤታኖል የዝናብ ሂደት በተጨማሪ፣ ፌኖል-ክሎሮፎርም የማውጣት ሂደትም ለዚህ ሊነሳሳ ይችላል። በዚህ ዘዴ, phenol በናሙናው ውስጥ የሚገኙትን ፕሮቲኖች ያስወግዳል.አንድ ጊዜ ሴንትሪፉድ ከተሰራ፣ የተዳከሙ ፕሮቲኖች በኦርጋኒክ ምዕራፍ ውስጥ ይቀራሉ፣ ከክሎሮፎርም ጋር የተቀላቀሉት የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች በውሃው ክፍል ውስጥ ይገኛሉ። ክሎሮፎርም የ phenol ቀሪዎችን ያስወግዳል። ማውጣቱ ከተጠናቀቀ በኋላ ዲ ኤን ኤ በ TE ቋት ወይም እጅግ በጣም ንጹህ ውሃ ውስጥ ይሟሟል።
አር ኤን ኤ ማውጣት ምንድነው?
አር ኤን ኤ ማጥራት አር ኤን ኤ ከባዮሎጂካል ናሙና የሚጸዳበት ሂደት ነው። በሴሎች እና በቲሹዎች ውስጥ ራይቦኑክሊዝ በመኖሩ ምክንያት ይህ ሂደት የተወሳሰበ ነው. Ribonuclease ኤንዛይም አር ኤን ኤ በፍጥነት የመቀነስ ችሎታ አለው. የሪቦኑክሊየስ ኬሚካላዊ ባህሪ እጅግ በጣም የተረጋጋ ነው, እና እነሱን ለማንቃት አስቸጋሪ ነው. ሪቦኑክሊየስን ገለልተኛ ማድረግ አማራጭ ነው። ይህ ኢንዛይም በሴሎች እና በቲሹዎች ውስጥ የሚገኝ በመሆኑ ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ልዩ ቴክኒኮች ተዘጋጅተዋል። ከብዙዎቹ ዘዴዎች ውስጥ፣ የተለመደው ዘዴ Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform Extraction ነው።
ምስል 02፡ RNA Extraction
የጓኒዲኒየም thiocynate-phenol-chloroform የማውጣት ዘዴ በሴንትሪፍግሽን እና በደረጃ መለያየት ላይ የተመሰረተ ነው። ሴንትሪፉጅ የሚደረገው ድብልቅ የውሃ ናሙና እና ፌኖል እና ክሎሮፎርምን ያካተተ የውሃ ሙሌት መፍትሄን ያካትታል። አንድ ጊዜ ሴንትሪፉድ ከተሰራ፣ መፍትሄው የላይኛው የውሃ ክፍል እና ዝቅተኛ የኦርጋኒክ ደረጃ በገለልተኛ ፒኤች ሁኔታዎች (pH 7-8) ያካትታል። አር ኤን ኤ በውሃው ክፍል ውስጥ ይገኛል. የኦርጋኒክ ደረጃው በተለምዶ በ phenol ውስጥ የሚሟሟ ፕሮቲኖችን እና በክሎሮፎርም ውስጥ የሚሟሟ ቅባቶችን ያካትታል። አንድ chaotropic ወኪል (የውሃ ሞለኪውሎች መካከል ሃይድሮጂን ቦንድ ለመስበር ችሎታ ያለው አንድ ሞለኪውል) ታክሏል; ይህ guanidinium thiocyanate በመባል ይታወቃል. ይህ ወኪል አር ኤን ኤ ሊያበላሹ የሚችሉ ራይቦኑክሊየስን የሚያጠቃልሉ ፕሮቲኖችን የመፍታት ችሎታ አለው እና በሴል ሊሲስ ውስጥ ይሳተፋል። በተጨማሪም አር ኤን ኤ ከ ribosomal ፕሮቲኖች ይለያል።የመጨረሻው የአር ኤን ኤ የመንጻት ደረጃ የውሃውን ክፍል ዝናብ በኢታኖል ማጠብ ነው። አር ኤን ኤ እንዲሁም ፈሳሽ ናይትሮጅን በመጠቀም ሊጸዳ ይችላል።
በDNA እና RNA Extraction መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ሁለቱም የማውጣት ሂደቶች እንደ ፌኖል እና ክሎሮፎርም ያሉ ጎጂ ኬሚካሎችን ይጠቀማሉ።
- ሴንትሪፍግሽን ለሁለቱም ሂደቶች አስፈላጊ ቴክኒክ ነው።
- ኤታኖል ዝናቡን ለማጠብ እና የተጣራ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ለማግኘት ይጠቅማል።
በዲኤንኤ እና አር ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
DNA vs RNA Extraction |
|
| ዲኤንኤ ማውጣት ዲኤንኤን ከአንድ አካል ወይም ናሙና የሚያወጣ ሂደት ነው። | አር ኤን ማውጣት አር ኤን ኤን ከናሙና የሚያወጣ ሂደት ነው። |
| እርምጃዎች | |
| የዲኤንኤ ማውጣት ሂደት በሶስት የተለያዩ ደረጃዎች የተዋቀረ ሲሆን ሁለት አማራጭ ደረጃዎች ያሉት። | የአር ኤን ኤ ማውጣት ሂደት በአራት የተለያዩ ደረጃዎች የተዋቀረ ነው። |
| ሪኤጀንቶች | |
| Surfactants፣ proteases (አማራጭ)፣ አልኮል፣ ክሎሮፎርም፣ ፌኖል፣ ሶዲየም አሲቴት ለዲኤንኤ ለማውጣት ጥቅም ላይ ይውላሉ። | Guanidium thiocyanate፣ክሎሮፎርም፣ ፌኖል፣ኤታኖል ለአር ኤን ኤ ለማውጣት ያገለግላሉ። |
ማጠቃለያ - DNA vs RNA Extraction
ዲኤንኤ እና አር ኤን ኤ ማውጣት የሞለኪውላር ባዮሎጂ፣ የዘረመል እና የባዮቴክኖሎጂ ጥናት የሙከራ ሂደቶች ወሳኝ ገጽታዎች ናቸው። ሁለቱም ሂደቶች ተመሳሳይ ሪአጀንቶችን ያካትታሉ፣ ነገር ግን አር ኤን ኤ ማውጣት የራይቦኑክሊዝስ እንቅስቃሴን የሚቀንስ ጓኒዲየም ቲዮሳይያኔት በመባል የሚታወቅ ልዩ ሬጀንትን ይጠቀማል።ይህ በዲኤንኤ እና በአር ኤን ኤ ማውጣት መካከል ያለው ዋና ልዩነት ነው።
አውርድ ፒዲኤፍ የDNA vs RNA Extraction
የዚህን ጽሁፍ ፒዲኤፍ ስሪት አውርደው እንደ ጥቅስ ማስታወሻ ከመስመር ውጭ ዓላማ መጠቀም ይችላሉ። እባኮትን የፒዲኤፍ ቅጂ እዚህ ያውርዱ በDNA እና RNA Extraction መካከል ያለው ልዩነት
