ቁልፍ ልዩነት - YAC vs M13 Phage Vector
ዲ ኤን ኤ ክሎኒንግ ጠቃሚ የዲ ኤን ኤ ፍጥረታቶችን ለማሰራጨት የሚያስችል አስፈላጊ ሂደት ነው። ዳግም የተዋሃደ ዲ ኤን ኤ ለመፍጠር የተለየ ዲ ኤን ኤ ከቬክተር ዲ ኤን ኤ ጋር መቀላቀልን ይጠይቃል ይህም ወደ አስተናጋጅ አካልነት ይለወጣል። ቬክተር የውጭ ጄኔቲክ ቁሳቁሶችን ወደ ሌላ ሕዋስ ወይም አካል ለመውሰድ እንደ ተሸከርካሪ ሆኖ የሚያገለግል የዲኤንኤ ሞለኪውል ነው። በአስተናጋጁ አካል ውስጥ ለመድገም እና ብዙ የዲ ኤን ኤ ቅጂዎችን ማምረት የሚችል መሆን አለበት። በዲ ኤን ኤ ክሎኒንግ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ የተለያዩ አይነት ቬክተሮች አሉ። እርሾ አርቴፊሻል ክሮሞሶም (YAC) እና M13 phage vector ከነሱ መካከል ሁለት ዓይነት ናቸው።በ YAC እና M13 phage vector መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት YAC ሰው ሰራሽ ክሮሞሶም ሲሆን በእርሾ ህዋሶች ውስጥ የሚባዛ ሲሆን M13 ፋጅ ቬክተር ደግሞ በE Coli ሕዋሳት ውስጥ የሚባዛ የባክቴሪዮፋጅ ኤም 13 ባለ ነጠላ ክብ ዲ ኤን ኤ ነው።
YAC ቬክተር ምንድን ነው?
YAC በሰው ሰራሽ መንገድ የተገነባ ክሮሞሶም ሲሆን ብዙ የውጭ ዲኤንኤ ተሸክሞ በእርሾ ህዋሶች ውስጥ የመድገም ችሎታ አለው። እሱ ሴንትሮሜር፣ ቴሎሜር እና በራስ ገዝ የሚባዙ ቅደም ተከተሎችን ለመድገም እና ለመረጋጋት አስፈላጊ ናቸው። YAC ውጤታማ የክሎኒንግ ቬክተር ለማድረግ የተመረጠ ምልክት ማድረጊያ ወይም ማርከሮችን እና ገደቦችን መያዝ አለበት። ከ1000 ኪ.ባ እስከ 2000 ኪ.ቢ የሚደርሱ ትላልቅ ቅደም ተከተሎች በ YAC ውስጥ ገብተው ወደ እርሾ ሊተላለፉ ይችላሉ።
ምስል 01፡ YAC Vector
M13 Phage Vector ምንድን ነው?
Bacteriophage M13 በ E Coli ውስጥ የሚያጠቃ እና የሚባዛ ቫይረስ ነው። የ M13 ባክቴሮፋጅ ጂኖም መጠኑ አነስተኛ ነው፣ ወደ 6.7 ኪ.ባ. ነጠላ-ክር፣ ክብ እና አዎንታዊ ስሜት ዲ ኤን ኤ ነው። ይህ ቫይረስ በተለይ ኢ ኮሊ ባክቴሪያን በF pilus ይጎዳል። ወደ ኤስኤስዲኤንኤ ወደ ባክቴሪያው ከገባ በኋላ ተጨማሪውን ፈትል በማዋሃድ ዲኤስዲኤንኤ ወይም የM13 መባዛት (RF) ይሆናል። RF በአስተናጋጁ አካል ውስጥ እንደ ፕላዝሚድ ባህሪ ሊኖረው ይችላል። ዲኤስዲኤንኤ በE Coli ውስጥ ይባዛል እና ኤስኤስዲኤንኤ አዳዲስ ፋጆችን ያመነጫል። እነዚህ አዳዲስ ፋጆች የአስተናጋጁን ሕዋስ ሳይገድሉ ከኢ ኮሊ ያለማቋረጥ ይለቀቃሉ። ይሁን እንጂ ኢንፌክሽኑ የኢ ኮሊ እድገትን ይቀንሳል. dsDNA ከባክቴሪያ ሴሎች ሊወጣ እና በዲኤንኤ ክሎኒንግ ውስጥ እንደ ቬክተር ሊያገለግል ይችላል። እነሱም M13 phage vectors በመባል ይታወቃሉ። በቀላሉ ሊሰሩ እና በተመሳሳይ መልኩ ለፕላዝማድ ቬክተሮች ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ።
የእነዚህ M13 ፋጆች የኢንፌክሽን ተፈጥሯዊ አቅም በጂን ክሎኒንግ ውስጥ እንደ ቬክተር ለመጠቀም እንደ ጥሩ ብቃት ሆኖ ያገለግላል።ኤም 13ን ወደ ቬክተር ሲሰራ ብዙ ንጥረ ነገሮች በጂኖም ውስጥ መካተት አለባቸው። እነሱም ጂን ለ lac repressor (lac I) ፕሮቲን፣ የ lac Z ጂን ኦፕሬተር-አቅራቢያ ክልል፣ የላክ ፕሮሞተር እና በርካታ ክሎኒንግ ሳይት (ፖሊሊንከር) ናቸው። የ M13 ዲኤስዲኤን እንደ ቬክተር ጥቅም ላይ ሲውል እንደ ፕላዝማድ ቬክተር ሊታከም ይችላል። ነገር ግን፣ የኤስኤስዲኤንኤ M13 አጠቃቀም በዲኤንኤ ቅደም ተከተል እና በሳይት-ተኮር ሚውቴጄኔሲስ ላይ ጥቅሞች አሉት።
M13 phage ቬክተር በ lacZ ክልል ውስጥ በርካታ የክሎኒንግ ሳይት ስለሚይዝ፣ IPTG እና X-Gal በያዙ የአጋር ሰሌዳዎች ላይ እንደገና የተዋሃዱ ቬክተሮች በቀላሉ በሰማያዊ/ነጭ ቅኝ ግዛት ተለይተው ይታወቃሉ። በጠፍጣፋዎቹ ላይ የሚመረቱ ሰማያዊ ሰሌዳዎች እንደገና የተዋሃዱ ፋጆችን አያካትቱም። ስለዚህ፣ ማስገቢያ ያላቸው ፋጆች ለክሎኒንግ ዓላማ ሊመረጡ ይችላሉ።
ምስል 02፡ Bacteriophage M13
በ YAC እና M13 Phage Vector መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC በጄኔቲክ ምህንድስና የተፈጠረ ክሮሞሶም ሲሆን ብዙ የውጭ ዲ ኤን ኤ ተሸክሞ በእርሾ ህዋሶች ውስጥ የመድገም ችሎታ አለው። | M13 ፋጌ ቬክተር በባክቴሪዮፋጅ ኤም 13 የተሰራ የቫይረስ ቬክተር ሲሆን የውጭ ዲኤንኤን ወደ ኢ ኮሊ ለማስገባት ያገለግላል። |
| ዓላማ | |
| YACዎች ትላልቅ የጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን ወደ እርሾ ለመጠቅለል የተነደፉ ናቸው። | M13 ፋጅ ቬክተሮች የውጭ ዲኤንኤን ወደ ኢ ኮሊ ለማስገባት ያገለግላሉ። |
| ርዝመት አስገባ | |
| YACዎች የሜጋባሴ መጠን ያላቸውን ጂኖሚክ ማስገቢያዎች (1000 ኪባ – 2000 ኪባ) ሊይዙ ይችላሉ። | የማስገቢያዎች መጠን 1,500 bps ነው። |
| ግንባታ | |
| YAC ዲኤንኤ ሳይነካው ለማጣራት አስቸጋሪ ነው እና YAC vector systemን ለመፍጠር ከፍተኛ ትኩረትን ይፈልጋል። | የሚከሰተው በሳይክሊክ ፎቶሲንተቲክ ኤሌክትሮን ሰንሰለት ነው። |
| መረጋጋት | |
| YAC ያልተረጋጋ ነው። | M13 ፋጆች በቀላሉ ሊወጡ ይችላሉ። |
| መጠን | |
| ኢንዛይሞች ትልልቅ ሞለኪውሎች ናቸው። | M13 ፋጆች ከYAC በላይ የተረጋጋ ናቸው። |
ማጠቃለያ – YAC vs M13 Phage Vector
YAC ትልቅ የጄኔቲክ ቁሶችን ወደ እርሾ ህዋሶች ለማስገባት የተወሰነ የእርሾ ክሮሞሶም ክልልን በመጠቀም በሰው ሰራሽ መንገድ የተገነባ የቬክተር ስርዓት ነው።ኤም 13 ፋጅ ቬክተር ከባክቴሪዮፋጅ M 13 የተገኘ የቬክተር ሥርዓት ሲሆን ኢ ኮላይን እንደ አስተናጋጅ አካል ይጠቀማል። ይህ በ YAC እና M13 Phage Vector መካከል ያለው ዋና ልዩነት ነው። ሁለቱም በዲኤንኤ ቴክኖሎጂ እና በጂን ክሎኒንግ ላይ እኩል ጠቃሚ ናቸው።
