የቁልፍ ልዩነት - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase በሞለኪውላር ባዮሎጂ ቴክኒኮች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውል ጠቃሚ ኢንዛይም ነው። በኑክሊዮታይድ መካከል የፎስፎዲስተር ቦንዶችን በመፍጠር ኑክሊዮታይድን ለመቀላቀል እንደ ሞለኪውል ሙጫ ይሠራል። የፎስፎዲስተር ቦንዶች በ 3' ሃይድሮክሳይል የስኳር ክፍል እና በ 5' መጨረሻ ፎስፌት ቡድን መካከል ይመሰረታሉ። የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የኦካዛኪን የዘገየ ፈትል ክፍልፋዮችን ለመቀላቀል በማባዛት ሂደት እና በዲኤንኤ መጠገኛ ዘዴዎች እና በቪትሮ ክሎኒንግ ሙከራዎች ወቅት የሚፈለገውን የፍላጎት ጂን ወደ ቬክተር ጂኖም ለመቀላቀል አስፈላጊ ነው። በአሁኑ ጊዜ በሞለኪውላር ባዮሎጂስቶች የሚጠቀሙባቸው ሁለት ዋና የዲ ኤን ኤ ሊጋሶች አሉ፡ T4 እና T7 DNA ligases።T4 DNA ligase ከ T4 ባክቴሪዮፋጅ ከተነጠሉ የመጀመሪያዎቹ ኢንዛይሞች አንዱ ነው. አነስተኛ ፕሮቲን የሆነው T7 DNA ligase ከ T7 ባክቴሪዮፋጅ የተነጠለ ኢንዛይም ነው። ይህ በT4 እና T7 DNA ligases መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
የDNA Ligase ተግባር ምንድነው?
DNA ligation በሶስት-ደረጃ ምላሽ ይከሰታል። የመጀመሪያው እርምጃ በኤቲፒ አልፋ-ፎስፈረስ ላይ የኒውክሊዮፊል ጥቃት ነው ኮቫለንት ኢንዛይም-አድኒሌት መካከለኛ በማመንጨት AMP ከመጨረሻው የጎን ሰንሰለት የላይሲን ናይትሮጅን ጋር የተያያዘ። በሁለተኛው እርከን ላይ የኑክሊዮፊል ጥቃት በኢንዛይም-adenylate ፎስፎረስ ላይ በ 5'-ፎስፌት-የተቋረጠ የዲ ኤን ኤ ንኡስ ክፍል, ላይሲን በመልቀቅ እና ዲ ኤን ኤ-adenylate ይፈጥራል. በመጨረሻው ደረጃ፣ DNA-adenylate በ 3'- OH በሌላ የDNA strand ተጠቃ፣ AMPን በመልቀቅ እና ፖሊኒኑክሊዮታይድን ይቀላቀላል።
T4 DNA Ligase ምንድነው?
T4 ሊጋሴ በሜሴልሰን፣ ዌይግል እና ኬለንበርገር የተነጠለ እና የታወቀው የመጀመሪያው ሊጋዝ ሲሆን በታሪክ የመጀመርያው የንግድ ሊጋዝ ነው።T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የፎስፎዲስተር ቦንድ ምስረታን የሚያነቃቃ የ ATP ጥገኛ ኢንዛይም ነው። እሱ 487 የአሚኖ አሲድ ቅሪቶች ያሉት ነጠላ ፖሊፔፕታይድ ሰንሰለት ነው እና የሞለኪውላዊ ክብደት 77 ኪ. ለእንቅስቃሴው በጣም ጥሩው ፒኤች በ7.5 - 8 ክልል ውስጥ ነው።
ምስል 01፡ T4 DNA Ligase
T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ፣ እንደ ስሙ እንደሚያመለክተው፣ በባክቴሪዮፋጅ ቲ 4 ውስጥ የሚገኝ እና ፋጅ በኢ.ኮላይ ሲጠቃ ኢንዛይም ሲያመነጭ ተነጥሎ ነበር። ኢንዛይሙ ባለ ሁለት ገመድ የዲ ኤን ኤ ዱፕሌክስን ከጫፍ ጫፍ ጋር ያገናኛል እና የሚታሰሩት ቁርጥራጮች እርስ በርስ መቀራረብ አለባቸው።
T7 DNA Ligase ምንድነው?
T7 ligase በT7 Bacteriophage የሚመረተው 41 kDa ፕሮቲን ሲሆን የኢ.ኮሊ ሴሎችን በመበከል ተለይቷል። የT7 ligase ዋና ተግባር የዲ ኤን ኤ ዱፕሌክስን በፎስፎዲስተር ትስስር ማገናኘት እና በክሎኒንግ ሙከራዎች ወቅት በአቅራቢያው ያሉትን የዲኤንኤ ቁርጥራጮች መቀላቀል ነው።ለ T7 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ በጣም ጥሩው ፒኤች በ 7.0 - 7.2 ክልል ውስጥ ይገኛል. T7 ligase በ ATP ጥገኛ ነው. T7 የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ኤ ዲቃላዎችን ማደንዘዝ ይችላሉ ፣ ይህም በሚገለበጥበት ጊዜ ያልተለመዱ ቅርጾች እንዲፈጠሩ ያደርጋል ። ሆኖም፣ ይህ ክስተት አሁንም በ in vitro ጥናቶች በጥናት ላይ ነው።
በT4 እና T7 DNA Ligase መካከል ያሉ ተመሳሳይነቶች ምንድን ናቸው?
- T4 እና T7 ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ በ3' OH መጨረሻ እና በ5' ፎስፌት የዲኤንኤ ክፍልፋዮች መካከል የዲ ኤን ኤ ዱፕሌክስን በፎስፎዲስተር ቦንድ ምስረታ በማሰር በሊጅሽን ምላሽ ይሳተፋሉ።
- ሁለቱም ኢንዛይሞች እርስ በርሳቸው በቅርበት የሚገኙትን የዲኤንኤ ዱፕሌክስ ያበቁ።
- ሁለቱም ኢንዛይሞች ATP ጥገኛ ናቸው።
- እነዚህ ኢንዛይሞች የኢ.ኮላይ ህዋሶችን በልዩ ባክቴሪዮፋጅ በመበከል ይገለላሉ።
- የሁለቱም ኢንዛይሞች መተግበሪያዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ፡
- ሞለኪውላር ክሎኒንግ - የፍላጎት ጂን ወደ ቬክተር
- የዲ ኤን ኤ ጥገና - ባለ ሁለት መስመር ኒች ለመጠገን
- በብልቃጥ ዲኤንኤ መባዛት
- የሊጋሴ ሰንሰለት ምላሽ
በT4 እና T7 DNA Ligase መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
T4 vs T7 DNA Ligase |
|
| T4 የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ አይነት ከባክቴሪዮፋጅ T4 ተለይቶ በፎስፎዲስተር ቦንድ ምስረታ በኩል የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን በማገናኘት ይሳተፋል። | T7 የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ አይነት ከባክቴሪያፋጅ T7 ተነጥሎ በፎስፎዲስተር ቦንድ ምስረታ አጎራባች የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን በማገናኘት ይሳተፋል። |
| የፕሮቲን መጠን | |
| የT4 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ መጠን 77 ኪዳ ነው - ከT7 ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ ጋር ሲነጻጸር ይበልጣል። | የT7 DNA ligase መጠን 41 ኪዳ ነው። |
| ምርጥ pH | |
| T4 DNA ligase የሚሰራው pH ክልል 7.5 - 8.0 ነው። | T7 DNA ligase የሚሰራው pH ክልል 7.0 - 7.2 ነው። |
ማጠቃለያ - T4 vs T7 DNA Ligase
ዲኤንኤ ሊጋዞች በሞለኪውላር ክሎኒንግ ውስጥ የሚሳተፉ ጠቃሚ የኢንዛይሞች ክፍል የፍላጎት ጂን የያዙ ድጋሚ የዲኤንኤ ሞለኪውሎችን ለማምረት ነው። የሊግሽን ምላሽ ኃይልን የሚጠቀም ምላሽ ነው እና ያሉትን ligases በማስተካከል ትክክለኛነትን ለማሻሻል አዳዲስ የምርምር ጥናቶች አሉ። T4 እና T7 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ በሞለኪውላር ባዮሎጂካል ቴክኒኮች ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁለት አይነት ጠቃሚ የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ኢንዛይሞች ናቸው። ቲ 7 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ከ T4 ከተበከለው ኢ.ኮላይ በመነጨው ዋናው ሊጋዝ ላይ የተመሰረተ የምርምር ውጤት ነው። T7 በትንሽ መጠን ምክንያት ተግባሩን ለማከናወን የበለጠ ቅልጥፍና እና ትክክለኛነት ይገለጻል። ይህ በ T4 እና T7 ligase መካከል ያለው ልዩነት ነው.
ከT4 vs T7 DNA Ligase ፒዲኤፍ ስሪት አውርድ
የዚህን መጣጥፍ የፒዲኤፍ ስሪት አውርደው ከመስመር ውጭ ዓላማዎች እንደ ጥቅስ ማስታወሻዎች መጠቀም ይችላሉ። እባኮትን የፒዲኤፍ ስሪት እዚህ ያውርዱ በT4 እና T7 Ligase መካከል ያለው ልዩነት።
