በT4 DNA ligase እና E.coli DNA ligase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት T4 DNA ligase ከባክቴሪዮፋጅ T4 የተነጠለ ኢንዛይም ሲሆን ኢ..
ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የፎስፎዲስተር ቦንድ በመፍጠር የዲኤንኤ ገመዶችን አንድ ላይ እንዲቀላቀሉ የሚያደርግ የተወሰነ የኢንዛይም አይነት ነው። በሕያዋን ፍጥረታት ዲ ኤን ኤ ውስጥ ነጠላ-ክር እረፍቶችን እና ባለ ሁለት-ክር እረፍቶችን በመጠገን ትልቅ ሚና ይጫወታል። ከዚህም በላይ የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ በሁለቱም የዲኤንኤ ጥገና እና የዲኤንኤ መባዛት ጥቅም ላይ ይውላል. ከላይ ከተጠቀሱት አጠቃቀሞች በተጨማሪ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች እንደ ዲ ኤን ኤ ቴክኖሎጂን የመሳሰሉ ብዙ ጥቅም ላይ ይውላል።T4 DNA ligase እና E.coli DNA ligase ሁለት አይነት የDNA ligase ኢንዛይሞች ናቸው።
T4 DNA Ligase ምንድነው?
T4 ligase የዲኤንኤ መቀላቀያ ኢንዛይም ነው ከባክቴሪዮፋጅ T4 የተነጠለ። T4 bacteriophage ኮላይን የሚያጠቃ ቫይረስ ነው። T4 ligase ኢንዛይም በሞለኪውላር ባዮሎጂካል ላብራቶሪ ምርምር ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለው የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ነው። በተለምዶ፣ T4 ligase በ5' ፎስፌት እና በ3' ሃይድሮክሳይል ቡድኖች መካከል በአቅራቢያው ባሉ ኑክሊዮታይድ መካከል ሁለት የተጣመሩ ወይም የደመቀ-ጨርስ ያላቸው ድርብ-ክር ዲ ኤን ኤ ክሮች መቀላቀልን ያነቃቃል። በተጨማሪም አር ኤን ኤ ወደ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ፈትል በሁለትፕሌክስ ሞለኪውል ውስጥ እንዲቀላቀል ያደርጋል። ሆኖም፣ ይህ ኢንዛይም ነጠላ-ክር የሆኑ ኑክሊክ አሲዶችን አይቀላቀልም። በተጨማሪም፣ ከኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ የበለጠ ቅልጥፍና ያለው ጠፍጣፋ-የተጠናቀቀ ዲ ኤን ኤ ሊይዝ ይችላል።
ምስል 01፡ T4 DNA Ligase
ይህ ኢንዛይም ATP እንደ ተባባሪ ይፈልጋል። አንዳንድ የጄኔቲክ ምህንድስና ምርምር ሙከራዎች ከዱር-አይነት T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የበለጠ ንቁ የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ኢንዛይሞችን አፍርተዋል። በአንደኛው አቀራረቦች፣ T4 DNA ligase ከ p50 ወይም NF-kB ሞለኪውል ጋር በማጣመር የተዋሃደ ኢንዛይም ሞለኪውል ፈጠሩ። ይህ አዲሱ T4 ligase ኤንዛይም ከዱር-አይነት ቲ 4 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ለክሎኒንግ ዓላማዎች በ blunt-end ligations ውስጥ በ160% የበለጠ ንቁ ነበር። በተጨማሪም የሊንጌሽን ምላሹን የበለጠ በትክክል ለማረጋጋት ለT4 DNA ligase በጣም ጥሩው የሙቀት መጠን 16 ° ሴ ነው።
ኢ ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ ምንድን ነው?
ኢ። ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ከኢ.ኮሊ ባክቴሪያ የተነጠለ ኢንዛይም ነው። ኢ. ኮላይ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የማድረግ ሃላፊነት ያለው ጂን ሊግ ጂን ነው። የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ፣ ሊጋዝ እና አብዛኞቹ ፕሮካርዮት ዲ ኤን ኤ ሊጋሶች፣ የፎስፎዲስተር ቦንድ ለመፍጠር በ NAD (ኒኮቲናሚድ አድኒን ዲኑክሊዮታይድ) የተገኘውን ሃይል ይጠቀማሉ።
ምስል 02፡ ኢ. ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ
ኢ። ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ የ 5’ ፎስፌት ተርሚኒ እና 3’ ሃይድሮክሳይል ተርሚኒን በያዙ ድርብ-ክር በሆኑ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች መካከል የፎስፎዲስተር ቦንዶች እንዲፈጠሩ በማድረግ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን መቀላቀል የሚችል የሊጌሽን ኢንዛይም ነው። ከዚህም በላይ በልዩ ሁኔታ እንደ ሞለኪውላዊ መጨናነቅ ከፖሊ polyethylene glycol ጋር ካልሆነ በስተቀር ጠፍጣፋ ዲ ኤን ኤ አይይዝም። እንዲሁም አር ኤን ኤ ወደ ዲ ኤን ኤ በብቃት መቀላቀል አይችልም። በተጨማሪም የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ እንቅስቃሴ በዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ 1 በትክክለኛው ትኩረት በመገኘቱ ሊሻሻል ይችላል። ነገር ግን የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴ 1 ኢንዛይም ክምችት ከፍ ያለ ሲሆን በE.coli DNA ligase እንቅስቃሴ ላይ አሉታዊ ተጽእኖ ይኖረዋል።
በT4 DNA Ligase እና E Coli DNA Ligase መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ እና ኢ-ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ሁለት አይነት የDNA ligase ኢንዛይሞች ናቸው።
- ሁለቱም ከአሚኖ አሲዶች የተሠሩ ፕሮቲኖች ናቸው።
- እነዚህ ኢንዛይሞች በጁክስታፖስት 5' ፎስፌት እና 3' ሃይድሮክሳይል ተርሚኒ በሁለትፕሌክስ ዲ ኤን ኤ መካከል ያለውን የፎስፎዲስተር ቦንድ መፈጠርን ያበረታታሉ።
- በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች እንደ ዲ ኤን ኤ ቴክኖሎጂ ያሉ ሰፊ አጠቃቀሞች አሏቸው።
በT4 DNA Ligase እና E Coli DNA Ligase መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ከባክቴሪዮፋጅ T4 የተነጠለ ኢንዛይም ሲሆን ኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ደግሞ ከኢ. ስለዚህ, ይህ በ T4 DNA ligase እና E.coli DNA ligase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው. በተጨማሪም ለ T4 DNA ligase የኃይል ምንጭ ATP ነው. በሌላ በኩል የE.coli DNA ligase የኃይል ምንጭ NAD ነው።
ከታች ያለው ኢንፎግራፊክ በT4 DNA ligase እና E coli DNA ligase መካከል ያለውን ልዩነት በጎን ለጎን ለማነፃፀር በሰንጠረዡ ያቀርባል።
ማጠቃለያ - T4 DNA Ligase vs E Coli DNA Ligase
T4 ዲ ኤን ኤ ሊጋሴ እና ኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ በጁክስታፖስት 5' ፎስፌት እና 3' ሃይድሮክሳይል ተርሚኒ መካከል የፎስፎዲስተር ትስስር እንዲፈጠር የሚያግዙ ሁለት ኢንዛይሞች ናቸው። T4 ligase ከባክቴሪዮፋጅ T4 የተነጠለ ኢንዛይም ሲሆን ኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ደግሞ ከኢ.ኮሊ ባክቴሪያ የተነጠለ ኢንዛይም ነው። ስለዚህ፣ ይህ በT4 DNA ligase እና E coli DNA ligase መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው።
