ቁልፍ ልዩነት - የኤስዲኤስ ገጽ ከምእራብ ብሎት አንፃር
የምዕራባዊያን ደም መፋሰስ ከፕሮቲን ናሙና የተወሰነ ፕሮቲን የሚለይ ዘዴ ነው። ይህ ዘዴ በበርካታ ቁልፍ እርምጃዎች ይከናወናል-ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ፣ መጥፋት እና ማዳቀል። ሶዲየም ዶዴሲል ሰልፌት ፖሊacrylamide gel electrophoresis (ኤስዲኤስ ገጽ) ፕሮቲኖችን እንደ መጠናቸው (ሞለኪውላዊ ክብደት) ለመለየት የሚያገለግል የጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስ ዘዴ ነው። ዌስተርን ብሎት በኤስዲኤስ ገጽ ውስጥ ያሉ ፕሮቲኖችን ተመሳሳይ ንድፍ ለማስተላለፍ የሚያገለግል ልዩ የመጥፋት ሽፋን ነው። በኤስዲኤስ ፔጅ እና በምእራብ ብሊት መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ኤስዲኤስ ገጽ ፕሮቲኖችን በድብልቅ እንዲለዩ የሚፈቅድ ሲሆን ምዕራባዊ ብሎት ደግሞ አንድን የተወሰነ ፕሮቲን ከውህድ ለመለየት እና ለመለካት ያስችላል።ሁለቱም በፕሮቲን ትንተና ጥናቶች ጠቃሚ ናቸው።
SDS ገጽ ምንድን ነው?
ኤስኤስኤስ ፔጅ ለፕሮቲን መለያየት የሚያገለግል ጄል ኤሌክትሮፎረሲስ ዘዴ ነው። በባዮኬሚስትሪ፣ በጄኔቲክስ፣ በፎረንሲክስ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ ይውላል። ፕሮቲኖች ከናሙናው ከተወሰዱ በኋላ በኤስዲኤስ እና በፖሊacrylamide በተሰራ ጄል ላይ ይሰራሉ። ኤስ.ዲ.ኤስ ፕሮቲኖችን (ዲናቸር ፕሮቲኖችን) መስመር ለማስያዝ እና በመስመራዊ ፕሮቲኖች ላይ ከሞለኪውላዊ ብዛታቸው ጋር ተመጣጣኝ የሆነ አሉታዊ ክፍያ ለመስጠት የሚያገለግል አኒዮኒክ ሳሙና ነው። ፖሊacrylamide ለጄል ጠንካራ ድጋፍ ይሆናል. በአሉታዊ መልኩ የተከሰቱ ፕሮቲኖች በጄል በኩል ወደ መሳሪያው አወንታዊ ጫፍ ይፈልሳሉ። እንደ ፕሮቲኖች መጠን, የፍልሰት ፍጥነት በፕሮቲኖች መካከል ይለያያል እና መለያየት ይከሰታል. ስለዚህ የኤስ.ዲ.ኤስ ገጽ ለግለሰብ ፕሮቲኖች እንደ መጠናቸው መለያየት ይጠቅማል።
የፖሊacrylamide gel ፕሮቲኖችን ክፍልፋይ ለማዘጋጀት በኤስዲኤስ ገጽ ውስጥ ወሳኝ እርምጃ ነው።ትክክለኛው የ polyacrylamide ትኩረት እና ጥቅም ላይ የሚውለው የመስቀል-አገናኝ ወኪል አይነት የጄል አካላዊ ባህሪያትን በእጅጉ ይነካል ፣ ይህም የተለያዩ ፕሮቲኖችን ትክክለኛ መለያየት ያደርገዋል። ውጤታማ መለያየት ለማግኘት ጄል ያለውን ቀዳዳ መጠኖች በአግባቡ መምራት አለበት. ሆኖም፣ የኤስዲኤስ ገጽ እንደ ከፍተኛ ጥራት ያለው የፕሮቲን መለያየት ቴክኒክ ተደርጎ ይወሰዳል።
SDS ገጽ ቴክኒክ በፕሮቲን ትንተና ላይ ትልቅ ገደብ አለው። ኤስዲኤስ ከመለያየቱ በፊት ፕሮቲኖችን ስለሚገድብ የኢንዛይም እንቅስቃሴን፣ የፕሮቲን ትስስርን፣ የፕሮቲን አጋሮችን፣ ወዘተ ለመለየት አይፈቅድም።
ምስል 01፡ የኤስዲኤስ ገጽ
የምእራብ ብሎት ምንድን ነው?
የምዕራባውያን መጥፋት ቴክኒክ አንድን የተወሰነ ፕሮቲን ከፕሮቲን ድብልቅ ለማወቅ እና የፕሮቲን መጠን እና ሞለኪውላዊ ክብደትን ለመለካት ያስችላል።ዌስተርን ብሎት በ SDS-ፖሊacrylamide gel ውስጥ ያሉትን የፕሮቲን ንድፎችን የመስታወት ምስል ለማግኘት በመጥፋት ሂደት ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለው ሽፋን ነው። ለምዕራባዊው ነጠብጣብ ጥቅም ላይ የሚውለው ሽፋን በአብዛኛው ናይትሮሴሉሎዝ ወይም ፖሊቪኒሊዲን ዲፍሎራይድ (PVDF) የተሰራ ነው። ከተዘዋወረው ፕሮቲን ጋር ያለው ሽፋን የሚፈለገውን ፕሮቲን ለመለየት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል. የተፈለገውን ፕሮቲን በማዳቀል ለመለየት ከፍተኛ ጥራት ያለው ፀረ እንግዳ አካላትን ይፈልጋል። ፀረ እንግዳ አካላት ከተለየ አንቲጂን ጋር በማገናኘት የሚፈለገውን አንቲጂን ፕሮቲን መኖሩን ያሳያል።
ፕሮቲኖችን ከኤስዲኤስ ፖሊacrylamide gel ወደ ምዕራባዊ ብሎት ማስተላለፍ የሚከናወነው በኤሌክትሮብሎቲንግ ነው። ፕሮቲኖች ከጄል ውስጥ ኤሌክትሮ ፎሬዝ እንዲፈጥሩ እና ወደ ናይትሮሴሉሎዝ ሽፋን (ዌስተርን ብሎት) እንዲያልፉ የሚያደርግ ውጤታማ እና ፈጣን ዘዴ ነው።
ሥዕል 02፡ ምዕራባዊ ብሎት
በኤስዲኤስ ገጽ እና በዌስተርን ብሎት መካከል ያለው ልዩነት ምንድነው?
ኤስዲኤስ ገጽ ከምእራብ ብሎት |
|
| SDS ገጽ የጄል ኤሌክትሮፎረሲስ ቴክኒክ ነው። | የምዕራባውያን ብሎት ከውህድ ውስጥ አንድን የተወሰነ ፕሮቲን ለማወቅ በገለባ ላይ የሚደረግ ቴክኒክ ነው። |
| ተጠቀም | |
| SDS ገጽ ፕሮቲኖችን እንደ መጠናቸው መለየት ያስችላል። | የምእራብ ብሎት ፕሮቲኖችን በኤስዲኤስ ገፅ ጄል ላይ ያለውን ስርዓተ-ጥለት ሳይቀይሩ ለማስተላለፍ ያስችላል እና ከተወሰኑ ፀረ እንግዳ አካላት ጋር ማዳቀል ያስችላል። |
| ጉዳቶች | |
| የፕሮቲን ድንክዬ፣ ከፍተኛ ወጪ እና የኒውሮቶክሲን ኬሚካሎች መኖር የዚህ ቴክኒክ ጉዳቶች ናቸው። | ይህ ዘዴ ብዙ ጊዜ የሚወስድ እና ጥሩ ልምድ ያለው የግል እና ልዩ ቁጥጥር የሚደረግበት ሁኔታዎችን ይፈልጋል። |
ማጠቃለያ - የኤስዲኤስ ገጽ ከምእራብ ብሎት አንፃር
SDS ገጽ እና ዌስተርን ብሎት በፕሮቲን ትንተና ውስጥ የሚካተቱ ሁለት ዘዴዎች ናቸው። የኤስዲኤስ ገጽ እንደ ሞለኪውላዊ ክብደታቸው በጄል ላይ ያሉ ፕሮቲኖችን በቀላሉ መለየት ያስችላል። የምዕራባውያን ጥፍጥፍ የተወሰኑ ፀረ እንግዳ አካላትን በማዳቀል የአንድ የተወሰነ ፕሮቲን መኖር እና መጠን ለማረጋገጥ ይረዳል። ይህ በኤስዲኤስ ገጽ እና በምዕራባዊ ብሎት መካከል ያለው ልዩነት ነው።
