ቁልፍ ልዩነት - የኤስዲኤስ ገጽ ከአገሬው ገጽ ጋር
SDS እና ቤተኛ ገጽ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁለት አይነት የ polyacrylamide gel electrophoresis ቴክኒኮች ናቸው። በኤስዲኤስ ገጽ እና ቤተኛ ገጽ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ጥቅም ላይ የዋለው የ polyacrylamide gel አይነት ነው። በኤስ.ዲ.ኤስ ገጽ ውስጥ ዲናቶሪንግ ጄል ጥቅም ላይ ይውላል ፣ ስለሆነም ሞለኪውሎች በሞለኪውላዊ ክብደታቸው ይለያያሉ። በአንጻሩ፣ በNative Page፣ denaturing ያልሆኑ ጄልዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ። ስለዚህ፣ ሞለኪውሎች የሚለያዩት በመጠን፣ ክፍያ እና ቅርፅ ላይ በመመስረት ነው።
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (ገጽ) አክሪላሚድ ሞኖመሮችን ከሜቲሊን ቢስክሪላሚድ ጋር ፖሊመራይዝ በማድረግ የተሰራ ጄል ይጠቀማል።ፖሊacrylamide ከአጋሮዝ የበለጠ ጠንካራ እና የበለጠ ሙቀት የተረጋጋ ነው። የ polyacrylamide gels ፕሮቲኖችን በብቃት ለመለያየት የሚያስችል ትንሽ ቀዳዳ አላቸው። ሁለት ዋና ዋና የገጽ ዓይነቶች አሉ SDS Page እና Native Page። SDS Page ወይም Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel electrophoresis በሞለኪውላዊ ክብደታቸው መሰረት ፕሮቲኖችን ይለያሉ። በኤስዲኤስ ገጽ ውስጥ የማስወገጃ ጄል ጥቅም ላይ ይውላል። ቤተኛ ገፅ ጥርስ የማያስገቡ ጄሎችን ይጠቀማል እና ፕሮቲኖችን እንደ መጠናቸው፣ ቻርጅያቸው እና ቅርፅ (3D conformation) ይለያል።
SDS ገጽ ምንድን ነው?
SDS ገጽ ፕሮቲኖችን በሞለኪውላዊ ክብደታቸው ለመለየት በጣም የተለመደው የኤሌክትሮፎረቲክ ዘዴ ነው። ጄል የሚሠራው ኤስዲኤስ (ሶዲየም ዶዴሲል ሰልፌት) በመጨመር ሲሆን ይህም ሳሙና ነው. SDS ፕሮቲኖችን ወደ ሞኖመሮች ያዘጋጃል። SDS አኒዮኒክ ሳሙና ነው። ስለዚህ, በሰፊ የፒኤች ክልል ውስጥ ባሉ ፕሮቲኖች ላይ የተጣራ አሉታዊ ክፍያን ይጨምራል. የተጣራ አሉታዊ ክፍያ በፕሮቲን ሞለኪውሎች ላይ በሚሰጥበት ጊዜ, በክፍያ ልዩነት ምክንያት, ውስብስብ አወቃቀሮች ተሰብረዋል.በአሉታዊ ክፍያ ምክንያት ፕሮቲኖች ወደ አወንታዊው መጨረሻ ይሳባሉ. ስለዚህ ዝቅተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ያላቸው ሞለኪውሎች በጄል ማትሪክስ ላይ በፍጥነት ይጓዛሉ እና ወደ አኖዶው አቅራቢያ ሊታዩ ይችላሉ, ነገር ግን ከፍ ያለ የሞለኪውላዊ ክብደት ፕሮቲኖች ወደ ጉድጓዶች አቅራቢያ ይታያሉ.
ምስል 01፡ የኤስዲኤስ ገጽ
ኤስዲኤስ ከፖሊፔፕታይድ ሰንሰለት ጋር ያለው ትስስር አንጻራዊ በሆነው ሞለኪውላዊ ጅምላ ጋር ተመጣጣኝ ነው። ስለዚህ፣ የሞለኪውላር ብዛቱ በኤስዲኤስ ገጽ በኩልም ሊወሰን ይችላል። የኤስዲኤስ ገጽ ጂልስ ቀለም በ bromophenol ሰማያዊ ቀለም ይሠራል. የኤስዲኤስ ገፅ አፕሊኬሽኖች አንጻራዊ ሞለኪውላዊ ጅምላውን ለመገመት እና በፕሮቲን ድብልቅ ውስጥ ያለውን አንጻራዊ የፕሮቲን ብዛት ለመወሰን ጥቅም ላይ ሊውል የሚችልበት ሰፊ መጠን አላቸው። የኤስዲኤስ ገጽ በፕሮቲኖች ድብልቅ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን ስርጭት ለመወሰንም ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።የኤስዲኤስ ገጽ ፕሮቲኖችን ለማጣራት እና ለመገምገምም ይተገበራል። ለምዕራባውያን መጥፋት እና ማዳቀል እንደ ቀዳሚ አሰራር ጥቅም ላይ ይውላል፣ እሱም በተራው ደግሞ ለፕሮቲን ካርታ ስራ እና መለያነት ያገለግላል።
ቤተኛ ገጽ ምንድነው?
Native Polyacrylamide gel electrophoresis (ቤተኛ ገጽ) - denaturing gel ይጠቀማል። ስለዚህ, ኤስዲኤስ ወይም ሌላ ማንኛውም የዴንገት ወኪል ወደ ጄል ማትሪክስ አይጨመርም. በNative Page የፕሮቲኖች መለያየት በክፍያ እና በፕሮቲን መጠን ላይ የተመሰረተ ነው። ስለዚህ የፕሮቲን ተንቀሳቃሽነት በክፍያው እና በፕሮቲን መጠን ይወሰናል።
የፕሮቲን ክፍያ የሚወሰነው በአሚኖ አሲዶች የጎን ሰንሰለቶች ላይ ነው። የጎን ሰንሰለቶች አሉታዊ በሆነ መልኩ ከተሞሉ, ፕሮቲኑ በአጠቃላይ አሉታዊ ክፍያ ይቀበላል እና በተቃራኒው. በተፈጠረው መታጠፍ ምክንያት ፕሮቲኖች የ3-ል መመሳሰልን ይይዛሉ። ማጠፍ ከፕሮቲኖች ውስጥ እንደ ዳይሰልፋይድ ቦንዶች፣ ሃይድሮፎቢክ መስተጋብር እና የሃይድሮጅን ቦንዶች ካሉ በርካታ የቦንድ ዓይነቶች ነው።ስለዚህ, የአገሬው ገጽ በገለልተኛ ፒኤች ከተሸከመ, ፕሮቲኖች በፕሮቲን ሞለኪውላዊ ቅርፅ መሰረት ይለያያሉ. ስለዚህ የፕሮቲን ለውጥን ወይም የተመጣጠነ ለውጥን ለመለየት ቤተኛ ገጽ እንደ ስሱ ቴክኒክ መጠቀም ይቻላል።
የአገሬው ፔጅ ዋና ጥቅሙ ለገጽ ትንተና የሚውለው ፕሮቲን ከገጽ ትንታኔ በኋላ ወደነበረበት መመለስ መቻሉ በሂደቱ ወቅት ፕሮቲኑ ስለማይረበሽ ነው። ቤተኛ ገጽ በአንፃራዊነት ከፍተኛ የመተላለፊያ ዘዴ ነው፣ እና የፕሮቲን መረጋጋት ይጨምራል።
ምስል 02፡ ቤተኛ ገጽ
የጌል ሩጫው እንደተጠናቀቀ የቤተኛ ፔጅ ጄል በብሮሞፌኖል ሰማያዊ ወይም ሌላ ተስማሚ የእድፍ reagent በመቀባት ሊታይ ይችላል። የNative Page አፕሊኬሽኖች ግላይኮፕሮቲኖችን ጨምሮ እንደ የሰው recombinant erythropoietin ወይም Bovine Serum Albumin (BSA) ውስጥ የሚገኙትን ፕሮቲኖች መለየትን ጨምሮ አሲዳማ ፕሮቲኖችን መለየትን ያጠቃልላል።
በኤስዲኤስ ገጽ እና ቤተኛ ገጽ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- ሁለቱም የኤስዲኤስ ገጽ እና ቤተኛ ገፅ ሲስተሞች ፖሊacrylamide gelን እንደ ጄል ማትሪክስ ይጠቀማሉ።
- ሁለቱም ፕሮቲኖችን ለመለየት እና ለመለየት ያገለግላሉ።
- ሁለቱም ውህዶቹን ለመለየት ኤሌክትሮ ፎረቲክ ተንቀሳቃሽነት ይጠቀማሉ።
- ሁለቱም በአቀባዊ ወይም በአግድም መንገድ ሊደረጉ ይችላሉ (በአብዛኛው እንደ ቋሚ ገጽ ማዋቀር ነው ምክንያቱም የሩጫው ርዝመት የበለጠ ነው)።
- የኤሌክትሮፊዮሬሲስ መሳሪያ ጄል ታንክን፣ ማበጠሪያዎችን፣ የሃይል አቅርቦቱን ጨምሮ ለሁለቱም ቴክኒኮች ስራ ያስፈልጋል።
- የጄል እይታ በሁለቱም ቴክኒኮች በማቅለም ሊከናወን ይችላል።
በኤስዲኤስ ገጽ እና ቤተኛ ገጽ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ኤስኤስኤስ ገጽ ከአገሬኛ ገጽ |
|
| SDS ገጽ ወይም ሶዲየም-ዶዴሲል ሰልፌት ገጽ ፕሮቲኖችን በሞለኪውላዊ ክብደታቸው ይለያቸዋል እና ዲንቴሽን ጄል ይጠቀማል። | ቤተኛ ፔጅ ጥርስ የማያስገቡ ጄልዎችን ይጠቀማል እና ፕሮቲኖችን እንደ መጠናቸው፣ ቻርጅያቸው እና ቅርፅ (3D conformation) ይለያል። |
| የጌል አይነት | |
| የ denaturing gel በSDS-ገጽ ላይ ጥቅም ላይ ይውላል። | አንድ ያልሆነ - denaturing gel በአፍ መፍቻ ገጹ ላይ ጥቅም ላይ ይውላል። |
| የኤስዲኤስ መኖር | |
| ኤስዲኤስ በኤስዲኤስ ገጽ ላይ ባለው ናሙና ላይ አሉታዊ ክፍያ ለማስተላለፍ እንደ ሳሙና አለ። | ኤስዲኤስ በአፍ መፍቻ ገጹ ላይ የለም። |
| የመለያያ መሰረት | |
| የፕሮቲኖች መለያየት በኤስዲኤስ ገጽ ላይ ባለው የፕሮቲን ሞለኪውላዊ ክብደት ይወሰናል። | መለያየቱ በአፍ መፍቻ ገጹ ላይ ባለው የፕሮቲን ሞለኪውል መጠን እና ቅርፅ ይወሰናል። |
| የፕሮቲን መረጋጋት | |
| የፕሮቲን መረጋጋት በኤስዲኤስ ገጽ ላይ ዝቅተኛ ነው። | የፕሮቲን መረጋጋት ከፍተኛ ነው። |
| የመጀመሪያው ፕሮቲን መልሶ ማግኘት | |
| በSDS ገጽ ላይ ስለተከለከለ አይቻልም። | በትውልድ ገፁ ላይ ይቻላል። |
ማጠቃለያ - የኤስዲኤስ ገጽ ከአገሬው ገጽ ጋር
SDS ገጽ እና ቤተኛ ገጽ ፕሮቲኖችን ለመለየት የሚያገለግሉ የፖሊacrylamide gel electrophoresis ቴክኒኮች ሁለት አይነት ናቸው። SDS ገጽ ኤስዲኤስ በሚባል ሳሙና ይታከማል። ኤስ.ዲ.ኤስ ለፕሮቲን አጠቃላይ አሉታዊ ክፍያን ይከፍላል ፣ ከዚያ በኋላ የፕሮቲን መሟጠጥን ያስከትላል።ስለዚህ, ፕሮቲኖች በሞለኪውላዊ ክብደታቸው መሰረት ይለያያሉ. በአንፃሩ፣ የNative Page ቴክኒክ ምንም አይነት የጥላቻ ወኪል አይጠቀምም። ስለዚህ ፕሮቲኖች እንደ መጠናቸው ወይም ቅርጻቸው ይለያሉ. ይህ በኤስዲኤስ ገጽ እና በቤተኛ ገጽ መካከል ያለው ልዩነት ነው።
