ቁልፍ ልዩነት - RAPD vs RFLP
በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ የዘረመል ማርከሮች በግለሰቦች እና በዝርያዎች መካከል ያሉ የዘረመል ልዩነቶችን ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላሉ። የዘፈቀደ አምፕሊፋይድ ፖሊሞርፊክ ዲ ኤን ኤ (RAPD) እና የገደብ ክፍልፋይ ርዝመት ፖሊሞርፊዝም (RFLP) በመደበኛነት በቤተ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁለት አስፈላጊ የሞለኪውላር ማርከሮች ናቸው። RAPD የሚከናወነው በአጭር እና በዘፈቀደ oligonucleotide primers ነው፣ እና እሱ በኦርጋኒክ ዲ ኤን ኤ ውስጥ ባለው አብነት ውስጥ ያሉትን በርካታ ቦታዎች በዘፈቀደ በማጉላት ላይ የተመሠረተ ነው። RFLP የሚከናወነው በተወሰነ ገደብ endonuclease ነው፣ እና እሱ የተመሰረተው በተፈጠሩት የእገዳ ቁራጮች እና ማዳቀል (polymorphism) ላይ ነው።በ RAPL እና RFLP መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት RAPD ያለ ቀድሞ ቅደም ተከተል እውቀት የሚሰራ PCR ቴክኒክ ሲሆን RFLP ግን በ PCR ውስጥ ያልተሳተፈ እና ቴክኒኩን ለማከናወን የቅድሚያ ተከታታይ እውቀትን የሚፈልግ መሆኑ ነው።
RAPD ምንድን ነው?
RAPD በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ጠቃሚ ሞለኪውላዊ ምልክት ነው። ፈጣን እና ቀላል ቴክኒክ ነው። RAPD የዒላማው የዲኤንኤ አብነት ብዙ ቦታዎች በዘፈቀደ በማጉላት ምክንያት የፖሊሞፈርፊክ ዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን የሚያመጣ ዘዴ ተብሎ ሊገለጽ ይችላል። RAPD ለ PCR ማጉላት አጫጭር oligonucleotide primers በዘፈቀደ ቅደም ተከተሎች ይጠቀማል. ፕሪመርሮች ያለ ቀዳሚ ቅደም ተከተል እውቀት ሰው ሰራሽ በሆነ መንገድ የተዋሃዱ ናቸው። ስለዚህ፣ እንደ ቀላል እና ጠቃሚ ቴክኒክ ይቆጠራል።
የሚከተሉት ዋና ደረጃዎች በRAPD ውስጥ ይሳተፋሉ።
- የዒላማ ዲኤንኤ ማውጣት
- በነሲብ የተመረጡ ፕሪመርቶችን በመጠቀም የታለመው ዲኤንኤ በርካታ ቦታዎችን ማጉላት
- Gel electrophoresis የተጨመሩ PCR ምርቶች
- በኤቲዲየም ብሮሚድ ቀለም መቀባት እና የፖሊሞርፊዝምን መለየት
በፕሪመር ማደንዘዣው ልዩነት የተነሳ በማጉላት ጊዜ የተለያየ ርዝመት ያላቸው የተለያዩ ቁርጥራጮች ይፈጠራሉ። ስለዚህ በጄል ላይ ያሉ የባንዲንግ ቅጦች በግለሰቦች እና ዝርያዎች መካከል የተለያዩ ናቸው. ስለዚህ፣ RAPD በመለየት እና በመለየት በኦርጋኒክ አካላት መካከል ያለውን የዘረመል ልዩነት ለማወቅ ያስችላል።
RAPD በተለያዩ የሞለኪውላር ባዮሎጂ ጥናቶች ለምሳሌ በቅርብ ተዛማጅ ዝርያዎች መካከል ያለውን የዘረመል ልዩነት በመለየት፣ የጂን ካርታ ስራ፣ የዲኤንኤ አሻራ፣ በዘር የሚተላለፉ በሽታዎችን መለየት፣ ወዘተ. ይተገበራል።
ምስል 01፡ RAPD
RFLP ምንድን ነው?
Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLPs) በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ የጄኔቲክ ልዩነትን በዲኤንኤ ተከታታይነት ለመለየት የሚያገለግል ሞለኪውላዊ ምልክት ነው። ለዲኤንኤ የጣት አሻራ የተሰራ የመጀመሪያው የዘረመል ምልክት ነው። ሁሉም ፍጥረታት በልዩ ገደብ ኢንዛይሞች ሲገደቡ ልዩ የሆኑ የዲኤንኤ መገለጫዎችን ያመነጫሉ። RFLP የግለሰቦችን ልዩ የዲኤንኤ መገለጫዎችን ለማምረት እና በመካከላቸው ያለውን የዘረመል ልዩነት ለመለየት እንደ አስፈላጊ መሳሪያ ሆኖ ያገለግላል። የዲኤንኤ ናሙናዎች ከተወሰኑ እገዳዎች ኤንዶኑክሊየስ ጋር ሲፈጩ ለእያንዳንዱ ግለሰብ ልዩ የሆኑ የተለያዩ የዲኤንኤ መገለጫዎችን ያመጣል. ስለዚህ የዚህ ዘዴ ዋናው ግብረ-ሰዶማዊ ዲ ኤን ኤ በተወሰኑ እገዳ ኢንዛይሞች በመገደብ እና በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እና በመጥፋት ላይ ያለውን የቁርጭምጭሚት ርዝመት ፖሊሞርፊዝምን በመመርመር በሰውነት አካላት መካከል ያለውን የዘረመል ልዩነት መለየት ነው። የማጥፋት ቅጦች ለእያንዳንዱ ፍጡር ልዩ ናቸው እና የተወሰኑ ጂኖአይፕዎችን ያሳያሉ።
የሚከተሉት እርምጃዎች ከRFLP ጋር ይሳተፋሉ።
- ከናሙናዎች በቂ መጠን ያለው ዲኤንኤ ማግለል
- የዲኤንኤ ናሙናዎችን ከተወሰነ ገደብ endonucleases ጋር በአጭር ቅደም ተከተል መከፋፈል
- የተለያዩ ርዝማኔ ያላቸውን ቁርጥራጮች በአጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፎረሲስ መለየት።
- የጄል ፕሮፋይልን በደቡባዊ መጥፋት ወደ ሽፋን ያስተላልፉ
- የገለባውን ማዳቀል እና በተሰየሙ መመርመሪያዎች እና የቁርጭምጭሚት ርዝመት ፖሊሞርፊዝም በየመገለጫው
RFLP የተለያዩ አፕሊኬሽኖች አሉት እንደ የውርስ በሽታዎች ምርመራ፣ የጂኖም ካርታ ስራ፣ በፎረንሲክ ጥናት የወንጀል መለየት፣ የአባትነት ምርመራ፣ ወዘተ።
ምስል 02፡ RFLP ጂኖታይፕ
በ RAPD እና RFLP መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
RAPD vs RFLP |
|
| RAPD በዘፈቀደ ፕሪመር እና PCR ላይ የተመሰረተ ሞለኪውላዊ ምልክት ነው። | RFLP የተለያዩ የርዝመት ገደብ ቁርጥራጮችን በማምረት ላይ የተመሰረተ ሞለኪውላዊ ምልክት ነው። |
| የሚያስፈልግ ናሙና | |
| ትንንሽ የዲኤንኤ ናሙናዎች ለRAPD ትንተና በቂ ናቸው። | ለ RFLP ትንተና ከፍተኛ መጠን ያለው የተወጣ የዲኤንኤ ናሙና ያስፈልጋል። |
| ጊዜ | |
| RAPD ፈጣን ሂደት ነው። | RFLP ጊዜ የሚወስድ ሂደት ነው። |
| ዋና አጠቃቀም | |
| የዘፈቀደ ፕሪመር ጥቅም ላይ ይውላል እና ተመሳሳይ ፕሪመር ለተለያዩ ዝርያዎች ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል። | ዝርያ-ተኮር መመርመሪያዎች በRFLP ውስጥ ለማዳቀል ጥቅም ላይ ይውላሉ። |
| አስተማማኝነት | |
| የቴክኒኩ አስተማማኝነት ከRFLP ጋር ሲነጻጸር ያነሰ ነው። | RFLP አስተማማኝ ቴክኒክ ነው። |
| ማጥፋት | |
| RAPD ደቡብ መደምሰስን ያካትታል። | የደቡብ መጥፋት የRFLP አንድ እርምጃ ነው። |
| የአሌሊክ ልዩነትን ማወቂያ | |
| አሌሊክ ልዩነቶች በ RAPD ሊገኙ አይችሉም። | አሌሊክ ልዩነቶች በRFLP ሊገኙ ይችላሉ። |
| የቅደም ተከተል እውቀት ፍላጎት | |
| RAPD የቀደመ ተከታታይ እውቀትን አይፈልግም። | የቀደመው ተከታታይ እውቀት ለምርመራ ዲዛይን ያስፈልጋል። |
| PCR | |
| PCR ከRAPD ጋር ይሳተፋል | PCR ከRFLP ጋር አልተሳተፈም። |
| መባዛት | |
| RAPD ዝቅተኛ መባዛት አለው | RFLP ከRAPD ጋር ሲወዳደር ከፍተኛ የመባዛት ችሎታ አለው። |
ማጠቃለያ - RAPD vs RFLP
RAPD እና RFLP በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ አስፈላጊ ምልክቶች ናቸው። ሁለቱም ዘዴዎች በኦርጋኒክ መካከል ያለውን የጄኔቲክ ልዩነት ለመለየት ይችላሉ. RAPD የሚከናወነው በዘፈቀደ ፕሪመር በመጠቀም ነው። RFLP የሚከናወነው የተወሰኑ እገዳ ኢንዛይሞችን በመጠቀም ነው። ሁለቱም ዘዴዎች ለግለሰብ ፍጥረታት ልዩ የሆኑ የዲኤንኤ መገለጫዎችን ይፈጥራሉ። RAPD ከ RFLP በተቃራኒ ጥቂት ደረጃዎችን ያካትታል። ነገር ግን ከ RFLP ያነሰ አስተማማኝ እና ሊባዙ የሚችሉ ውጤቶችን ያስገኛል. ይህ በ RAPD እና RFLP መካከል ያለው ዋና ልዩነት ነው።
