ቁልፍ ልዩነት - AFLP vs RFLP
የዲኤንኤ ጥናቶች የፊሎጄኔቲክ ግንኙነቶችን በመረዳት እና በመወሰን፣ በዘር የሚተላለፉ በሽታዎችን በመመርመር እና የኦርጋኒክ ጂኖምዎችን በካርታ በማዘጋጀት ረገድ ትልቅ ጠቀሜታ አላቸው። ከዲኤንኤ ትንተና ጋር የተያያዙ በርካታ ቴክኒኮችም ለአንድ የተወሰነ ጂን ወይም የዲኤንኤ ቅደም ተከተል በማይታወቅ የዲ ኤን ኤ ገንዳ ውስጥ ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላሉ። ሞለኪውላር ማርከሮች በመባል ይታወቃሉ. አምፕሊፋይድ ፍራግመንት ርዝማኔ ፖሊሞርፊዝም (ኤኤፍኤልፒ) እና የገደብ ክፍልፋይ ርዝመት ፖሊሞርፊዝም (RFLP) በሞለኪውላር ባዮሎጂ የተገነቡት እነዚህ ሁለት ሞለኪውላር ማርከሮች (ዘዴዎች) በሰውነት አካላት መካከል ያለውን የዘረመል ልዩነት ለመለየት ነው። ሁለቱም ዘዴዎች እኩል ጠቀሜታ ያላቸው እና ጥቅሞች እና ጉዳቶች አሏቸው.በ AFLP እና RFLP መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት AFLP የተመረጠ PCR የተፈጨውን ዲ ኤን ኤ ሲጨምር RFLP ደግሞ የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን መራጭ PCR ማጉላትን አያካትትም።
AFLP ምንድን ነው?
AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ጠቃሚ መሳሪያ ሲሆን በጄኔቲክ ልዩነት ትንተና ላይ በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። AFLP የተከፋፈለው የጂኖም ዲ ኤን ኤ ልዩ PCR ማጉላት እና ፖሊሞርፊዝምን በአውቶራዲዮግራፍ በጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስ ማወቂያ ላይ የተመሰረተ ነው። AFLP በዘር ወይም በቅርብ ተዛማጅነት ባላቸው የተለያዩ ግዛቶች ውስጥ ተክሎችን፣ እንስሳትን፣ ባክቴሪያዎችን እና ፈንገሶችን ጨምሮ የዘር ልዩነቶችን ለመለየት በሰፊው አስተዋፅዖ ያደርጋል። AFLP በትንሽ መጠን ባልታወቁ የዲኤንኤ ናሙናዎች ሊከናወን ይችላል። የቅድሚያ ቅደም ተከተል እውቀት እና የመመርመሪያ ንድፍ አይፈልግም።
የAFLP እርምጃዎች
- የዲኤንኤ ማግለል
- የዲኤንኤ መፈጨት ከተከለከሉ ኢንዶኑክሊየስ ጋር
- የተገደበ የዲኤንኤ ቁርጥራጮች ከአስማሚዎች ጋር
- የተመረጡ የቁርጥራጮች ማጉላት ከተወሰኑ ገደቦች ጋር
- የ PCR ምርቶችን በጄል ኤሌክትሮፎረሲስ መለየት
- የጄል ማትሪክስ በአውቶራዲዮግራፍ
ኤኤፍኤልፒ የበለጠ ሚስጥራዊነት ያለው እና ሊባዛ የሚችል ዘዴ ሲሆን ይህም ስለ ዲኤንኤ ቅደም ተከተሎች አስቀድሞ ሳያውቅ ፈንገሶችን፣ ባክቴሪያን፣ እፅዋትን እና እንስሳትን ጨምሮ ለተለያዩ ታክሶች በDNA መገለጫ ውስጥ ሊያገለግል ይችላል። በጣም ስሜታዊ ባህሪ ስላለው በሕዝብ ውስጥ ባሉ ግለሰቦች መካከል ትንሽ ልዩነቶችን ለመለየት ይረዳል። AFLP በጂኖም ካርታ ስራ፣ በፎረንሲክ ጥናቶች፣ በወላጆች ሙከራ፣ በጂኖቲፒ ወዘተ. ላይም አስፈላጊ ነው።
ምስል 01፡ AFLP
RFLP ምንድን ነው?
Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLPs) ግብረ ሰዶማዊ በሆነ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ውስጥ ያሉ የዘረመል ልዩነቶችን ለመለየት የሚያገለግል ዘዴ ነው።ለዲኤንኤ ፕሮፋይል የተሰራ የመጀመሪያው ዘዴ ነው. ፍጥረታት ልዩ የዲኤንኤ አሻራዎች ወይም የዲኤንኤ መገለጫዎች አሏቸው። የተመሳሳይ ቅደም ተከተሎች ለአንድ አካል ልዩ የሆኑ የተለያዩ ገደቦች ስላላቸው RFLP በዲኤንኤ መገለጫዎች መካከል ያለውን ልዩነት ለመተንተን እንደ ጠቃሚ መሣሪያ ሆኖ ያገለግላል። ተመሳሳይነት ያለው ዲ ኤን ኤ በተወሰኑ እገዳዎች (endonucleases) ሲፈጩ ለእያንዳንዱ ግለሰብ ልዩ የሆኑ የተለያዩ የዲኤንኤ መገለጫዎችን ያስከትላል። ስለዚህ የዚህ ዘዴ ዋናው ግብረ-ሰዶማዊ ዲ ኤን ኤ በተወሰኑ እገዳ ኢንዛይሞች በመገደብ እና በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እና በመጥፋት ላይ ያለውን የቁርጭምጭሚት ርዝመት ፖሊሞርፊዝምን በመመርመር በሰውነት አካላት መካከል ያለውን የዘረመል ልዩነት መለየት ነው። የማጥፋት ቅጦች ለእያንዳንዱ ፍጡር ልዩ ናቸው እና የተወሰኑ ጂኖአይፕዎችን ያሳያሉ።
የRFLP ደረጃዎች
- ከናሙናዎች በቂ መጠን ያለው ዲኤንኤ ማግለል
- የዲኤንኤ ናሙናዎችን ከተወሰነ ገደብ endonucleases ጋር በአጭር ቅደም ተከተል መከፋፈል
- የተለያዩ ርዝማኔ ያላቸውን ቁርጥራጮች በአጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፎረሲስ መለየት።
- የጄል ፕሮፋይልን በደቡባዊ መጥፋት ወደ ሽፋን ያስተላልፉ
- የገለባውን ማዳቀል እና በተሰየሙ መመርመሪያዎች እና የቁርጭምጭሚት ርዝመት ፖሊሞርፊዝም በየመገለጫው
RFLP የበሽታ ውርስን በመለየት እና በቤተሰብ አባላት መካከል የበሽታውን የመከሰት እድል ለማግኘት በጣም ጠቃሚ ዘዴ ነው። RFLP በጂኖም ካርታ ስራ፣ በፎረንሲኮች፣ በአባትነት ምርመራ ወዘተ ወንጀለኞችን በመለየት ብዙ ጊዜ ጥቅም ላይ ይውላል። RFLP እንዲሁ ብዙ ገደቦች አሉት። RFLP ለማዳቀል መመርመሪያዎችን ለመንደፍ የቅደም ተከተል ውሂብን ቀዳሚ እውቀት ይፈልጋል። እንዲሁም ለመተንተን በቂ መጠን ያለው ዲኤንኤ ከናሙናው መነጠልን ይጠይቃል ይህም በፎረንሲክ ጥናቶች አስቸጋሪ ነው።
ምስል 01፡ RRFLP ካርታ ስራ
በAFLP እና RFLP መካከል ያለው ልዩነት ምንድነው?
ALFP vs RFLP |
|
| AFLP የተመረጠ PCR የተፈጨውን ዲኤንኤ ማጉላትን ያካትታል። | RFLP PCR-RFLP ካልሆነ በስተቀር PCRን አያካትትም። |
| የቅደም ተከተል እውቀት | |
| የቀደመው ተከታታይ እውቀት አያስፈልግም። | የ RFLP መመርመሪያዎችን ለመንደፍ የቀደመ ተከታታይ እውቀት ያስፈልጋል። |
| አስተማማኝነት | |
| ይህ የበለጠ አስተማማኝ ነው። | ይህ ከ AFLP ጋር ሲወዳደር ያነሰ አስተማማኝ ነው። |
| ፖሊሞርፊዝምን የመለየት ብቃት | |
| ይህ ከRFLP የበለጠ ፖሊሞርፊዝምን በመለየት ረገድ ከፍተኛ ብቃት አለው። | ይህ ከ AFLP ጋር ሲወዳደር ያነሰ ቀልጣፋ ነው። |
| ወጪ | |
| ይህ ከRFLP ጋር ሲወዳደር ትንሽ ውድ ነው። | ይህ ከ AFLP ጋር ሲወዳደር ያነሰ ውድ ነው። |
| መተግበሪያዎች | |
| ኤኤፍኤልፒዎች በጂኖም ካርታ ስራ፣ በዲኤንኤ አሻራ፣ በዘረመል ልዩነት ጥናቶች፣ በአባትነት ምርመራ እና በፎረንሲክስ ላይ ተተግብረዋል። | የRFLP ትንተና በጂኖም ካርታ ስራ፣ ጂኖችን ለጄኔቲክ መታወክ አካባቢያዊ ማድረግ፣ ለበሽታ ተጋላጭነትን መወሰን እና የአባትነት ምርመራ ላይ ጠቃሚ መሳሪያ ነው። |
ማጠቃለያ - AFLP vs RFLP
AFLP እና RFLP ብዝሃነትን ለመገምገም እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ የጄኔቲክ ግንኙነቶችን ለመገምገም እንደ ጄኔቲክ ማርከር የሚያገለግሉ ቴክኒኮች ናቸው።AFLP ከ RFLP ይልቅ በአካል ጉዳተኞች መካከል የዘረመል ፖሊሞርፊዝምን ለመለየት እንደ ቀልጣፋ እና ስሜታዊ ዘዴ ሆኖ ያገለግላል። ይሁን እንጂ ሁለቱም እነዚህ ዘዴዎች የዘረመል ልዩነቶችን በመለየት ረገድ የተለያዩ ብቃቶች ቢኖራቸውም አሁንም ለዲኤንኤ የጣት አሻራ እና የበሽታ ምርመራ ጥቅም ላይ ይውላሉ።
