በብራድፎርድ እና በዝቅተኛ ፕሮቲን መገምገሚያ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ በቀለም ኮማሲ ብሩህ ሰማያዊ G-250 የመምጠጥ ለውጥ ላይ የተመሰረተ ሲሆን የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ ደግሞ በመዳብ ions (Cu+) ions ምላሽ ላይ የተመሰረተ ነው። በፔፕታይድ ቦንዶች ኦክሳይድ ከፎሊን-ሲዮካልቴው ሬጀንት ጋር ተሰራ።
አሳይ የናሙና ዋና ዋና ተግባራዊ ክፍሎችን ለመለየት የሚረዳ የትንታኔ ዘዴ ነው። ስለዚህ፣ አንድ ግምገማ የጥራት ወይም የመጠን ፈተና ሊሆን ይችላል። የላብራቶሪ ሕክምና፣ ፋርማኮሎጂ፣ የአካባቢ ባዮሎጂ፣ ሞለኪውላር ባዮሎጂ፣ ባዮኬሚስትሪ፣ እና ኢሚውኖሎጂን ጨምሮ ብዙ መስኮች እንደዚህ አይነት ምርመራዎችን በመደበኛነት ይጠቀማሉ።የብራድፎርድ እና የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ በናሙና መፍትሄ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን የሚወስኑ ሁለት ባዮኬሚካላዊ ሙከራዎች ናቸው። ሁለቱም መገምገሚያዎች ውጤቶችን ለማቅረብ ባለቀለም ቴክኒኮችን ይጠቀማሉ።
ብራድፎርድ ፕሮቲን አሳይ ምንድነው?
Bradford protein assay ለፕሮቲን ትንተና ፈጣን ስፔክትሮስኮፒክ ትንታኔ ሂደት ነው። በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን ሲለካ ከፍተኛ ትክክለኛነት ያሳያል. ማሪዮን ብራድፎርድ ይህንን አሰራር በ 1976 አስተዋወቀ በዚህ ግምገማ ውስጥ አጠቃላይ ምላሽ በሚለካው ፕሮቲኖች አሚኖ አሲድ ስብጥር ላይ የተመሠረተ ነው። በሌላ አገላለጽ የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ የቀለም መለኪያ ነው። ማቅለሚያውን Coomassie ብሩህ ሰማያዊ ይጠቀማል. ስለዚህ ይህ የኮሎሪሜትሪክ ፕሮቲን ምርመራ የሚወሰነው በቀለም የመምጠጥ ለውጥ ላይ ነው። Coomassie ብሩህ ሰማያዊ G-250 በሶስት ቅርጸቶች አለ፡ cationic (ቀይ)፣ አኒዮኒክ (ሰማያዊ) እና ገለልተኛ (አረንጓዴ)። በአሲዳማ ሁኔታዎች ውስጥ, የቀይው ቀለም ወደ ሰማያዊ ይለወጣል. የፕሮቲን ትስስርን ያረጋግጣል. ፕሮቲኑ ከሌለ, መፍትሄው ቡናማ ቀለም ውስጥ ሊቆይ ይችላል.
ምስል 01፡ ብራድፎርድ ፕሮቲን አሳይ
የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ በፕሮቲን መፍትሄ ውስጥ ለሚገኙ የተለያዩ ኬሚካላዊ ውህዶች ጣልቃገብነት ብዙም የተጋለጠ ስለሆነ ከሌሎች የፕሮቲን ሙከራዎች ይለያል። እነዚህ ውህዶች ሶዲየም፣ ፖታሲየም፣ ግሉኮስ እና ሱክሮስ ወዘተ ያካትታሉ።
የሎሪ ፕሮቲን ምርመራ ምንድነው?
የዝቅተኛ ፕሮቲን ምርመራ በመፍትሔ ውስጥ ያለውን አጠቃላይ የፕሮቲን መጠን ለመወሰን የሚያገለግል ባዮኬሚካል ጥናት ነው። ኦሊቨር ኤች ሎሪ በ 1940 ይህንን ሪጀንት ያዘጋጀው ሰው ነው. አሰራሩ የመፍትሄውን አጠቃላይ የፕሮቲን ክምችት በመፍትሔው ውስጥ ካለው የፕሮቲን ክምችት ጋር ተመጣጣኝ በሆነ የቀለም ለውጥ ያሳያል። ስለዚህ፣ ይህ የኮሎሪሜትሪክ ፕሮቲን ግምገማ ነው።
በፔፕታይድ ቦንዶች ኦክሳይድ እና በፎሊን-ሲዮካልቴዩ ሬጀንት በመዳብ ions (Cu+) መካከል ያለው ምላሽ የዚህ አሰራር መሰረት ነው።እንዲሁም ይህ ሬጀንት ፎስፎሞሊብዲክ አሲድ እና ፎስፎር-ቱንግስቲክ አሲድ ይዟል። ይሁን እንጂ የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ ምላሽ ዘዴ በደንብ አልተረዳም. ነገር ግን የ Folin–Cioc alteu reagentን በመቀነስ የሳይስቴይን፣ ትራይፕቶፋን እና ታይሮሲን ቅሪቶችን ኦክሳይድ ማድረግን ያካትታል።
ምስል 02፡ ዝቅተኛ የፕሮቲን ሙከራ
የሳይስቴይን ቅሪቶች በሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ ላይ ለሚታየው መምጠጥ አስተዋፅኦ ያደርጋሉ እና ምላሹም ብሩህ ሰማያዊ ሞለኪውል ይፈጥራል። ሄትሮፖሊ ሞሊብዲነም ሰማያዊ. የዚህ ሞለኪውል ቅነሳ የሚለካው በ 660nm በመምጠጥ ነው. ስለሆነም የ Folin–Cioc alteu ሬጀንት እንዲቀንስ ያደረገው የሳይስቴይን እና ትራይፕቶፋን ቅሪቶች በመፍትሔው ውስጥ ያለውን አጠቃላይ የፕሮቲን መጠን ይቀንሳል።
በብራድፎርድ እና በሎሪ ፕሮቲን አሳይ መካከል ያለው ተመሳሳይነት ምንድን ነው?
- የብራድፎርድ እና የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራዎች በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን ይወስናሉ።
- ሁለቱም ዘዴዎች የቀለም ዘዴ ናቸው።
- እንዲሁም የሁለቱም ዘዴዎች ትብነት ከፍተኛ ነው።
በብራድፎርድ እና ሎሪ ፕሮቲን አሳይ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?
ብራድፎርድ እና ሎውሪ ፕሮቲኖች በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን የሚወስኑ ሁለት ዓይነት ሙከራዎች ናቸው። የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ በCoomassie ብሩህ ሰማያዊ G-250 የመምጠጥ ለውጥ ላይ የሚመረኮዝ ሲሆን የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ በፔፕታይድ ቦንዶች ኦክሳይድ በተፈጠሩት የመዳብ ions ምላሽ ላይ የተመሰረተ ሲሆን ከፎሊን-ሲዮካልቴው ሬጀንት ጋር። ስለዚህ ይህ በብራድፎርድ እና በሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ነው። የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ ውጤትን ለማምጣት 15 ደቂቃ ይወስዳል እና የሎሬይ ፕሮቲን ምርመራ ውጤትን ለማምጣት ከ40-60 ደቂቃ ይወስዳል። ስለዚህ, ይህ በብራድፎርድ እና በሎውሪ ፕሮቲን መካከል ያለው ሌላ ልዩነት ነው. በተጨማሪም የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ በአሚኖ አሲድ ስብጥር ላይ የተመሰረተ ሲሆን የሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ በከፊል በአሚኖ አሲድ ስብጥር ላይ የተመሰረተ ነው.ስለዚህ ይህ እንዲሁ በብራድፎርድ እና በሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ መካከል ያለው ልዩነት ነው።
ከታች ኢንፎራፊክ በብራድፎርድ እና በሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ መካከል ስላለው ልዩነት ተጨማሪ ዝርዝሮችን ይሰጣል።
ማጠቃለያ - ብራድፎርድ vs ሎሪ ፕሮቲን አሳይ
አሳይ የናሙና ዋና ዋና ተግባራዊ ክፍሎችን ለመለየት የሚያገለግል የትንታኔ ዘዴ ነው። ብራድፎርድ እና ሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ በኮሎሪሜትሪክ ቴክኒኮች ውስጥ የሚሰሩ ሁለት አይነት የፕሮቲን ምርመራዎች ናቸው። ሁለቱም ብራድፎርድ እና ሎውሪ ፕሮቲን በመፍትሔ ውስጥ ያለውን የፕሮቲን መጠን ይወስናሉ። ይሁን እንጂ በብራድፎርድ እና በሎሪ ፕሮቲን አሴይ መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት በሚጠቀሙት የቀለም መለኪያ ዘዴ ላይ ነው። የብራድፎርድ ፕሮቲን ምርመራ የ Coomassie ድንቅ ሰማያዊ G-250 ይጠቀማል ሎሪ ፕሮቲን ምርመራ ደግሞ የመዳብ ions (Cu+) ions እና Folin–Cioc alteu reagent ይጠቀማል።በተጨማሪም የብራድፎርድ ዘዴ ከሎውሪ ፕሮቲን ምርመራ ይልቅ ፈጣን ውጤቶችን ይሰጣል። ነገር ግን ሁለቱም ዘዴዎች በጣም ሚስጥራዊነት ያላቸው እና ከተለያዩ ንጥረ ነገሮች ጣልቃ የሚገቡ ናቸው።
