የቁልፍ ልዩነት - Probe vs Primer
የሞለኪውላር ፍተሻ በዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ውስጥ ያሉትን ተጨማሪ ቅደም ተከተሎች የሚያውቅ እና የዒላማውን ቅደም ተከተል ለመለየት የሚያስችል ትንሽ የዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ቁራጭ ነው። ፕሪመር ለዲኤንኤ ውህደት መነሻ ሆኖ የሚያገለግል ትንሽ የዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ነው። ፕሪመርሮች እና መመርመሪያዎች ከአብነት ዲ ኤን ኤ ወይም ኢላማው ዲኤንኤ ከተሟሉ ኑክሊዮታይዶች ጋር ይቀላቀላሉ። ነገር ግን በምርምር እና በፕሪመር መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ፕሪመር ለዲኤንኤ መባዛት አስፈላጊ ሲሆኑ መመርመሪያዎች በናሙና ዲ ኤን ኤ ውስጥ የተወሰኑ ቅደም ተከተሎችን ለመለየት አስፈላጊ ናቸው።
መመርመሪያ ምንድነው?
Probe በሞለኪውላር ማዳቀል በናሙና ውስጥ የታለመውን ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ለማወቅ የሚያገለግል ትንሽ የዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ ቁራጭ ነው።በተጨማሪም ሞለኪውላዊ ጠቋሚዎች በመባል ይታወቃሉ. የፍተሻው ርዝመት ሊለያይ ይችላል (ከ 100 እስከ 1000 መሠረቶች), እና የመርማሪው ኑክሊዮታይድ ከዒላማው ቅደም ተከተል ክፍል ጋር ተጨማሪ ናቸው. በቀላሉ ለማወቅ, መመርመሪያዎች በሬዲዮአክቲቭ አይሶቶፖች ወይም በፍሎረሰንት ማቅለሚያዎች ወይም ፀረ እንግዳ አካላት ተለጥፈዋል. መመርመሪያዎች ከዒላማው ቅደም ተከተል ማሟያ መሠረቶች ጋር ይተሳሰራሉ እና በናሙናው ውስጥ የታለመውን ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ መኖሩን ያሳያሉ። መመርመሪያዎችን ለመሰየም ሁለት ዋና ዘዴዎች አሉ-የመጨረሻ መለያ እና የኒክ ትርጉም። መመርመሪያዎች የDNA መመርመሪያዎች፣ አር ኤን ኤ መመርመሪያዎች፣ ሲዲኤንኤ ፕሮብ እና ሰው ሰራሽ ኦሊጎኑክሊዮታይድ መመርመሪያዎችን ጨምሮ በተለያዩ ዓይነቶች ይከፋፈላሉ እና የተለያዩ ቴክኒኮችን በመጠቀም ይዘጋጃሉ።
መመርመሪያዎች እንደ ቫይሮሎጂ፣ ፎረንሲክ ፓቶሎጂ፣ የአባትነት ምርመራ፣ የዲኤንኤ የጣት አሻራ፣ የዘረመል በሽታዎችን መለየት፣ RFLP፣ ሞለኪውላር ሳይቶጄኔቲክስ፣ በሳይቱ ማዳቀል፣ወዘተ የመሳሰሉ አስፈላጊ መሳሪያዎች ናቸው በብዙ ማይክሮቢያል እና ሞለኪውላዊ አካባቢዎች።
ሥዕል 01፡ በ FISH ውስጥ በሽታ አምጪ ተህዋስያንን ለማወቅ በፍሎረሰንት ምልክት የተደረገበት መጠይቅ
ፕራይመር ምንድን ነው?
ፕሪመር አጭር የዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ ቁርጥራጭ ሲሆን ይህም ለዲኤንኤ ውህደት እንደ ጀማሪ ሆኖ ያገለግላል። የዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ኢንዛይም ኑክሊዮታይድ ወደ 3' OH ቡድን የፕሪመር ቅደም ተከተል ያክላል እና አዲሱን ፈትል ከአብነት ዲ ኤን ኤ ጋር ያዋህዳል። ፕሪመርስ ከ18 እስከ 20 ኑክሊዮታይድ ርዝማኔ ያላቸው በጣም አጫጭር ቁርጥራጮች ናቸው። በላብራቶሪ ውስጥ በቫይትሮ ዲ ኤን ኤ ማጉላት (PCR) ውስጥ በኬሚካል የተዋሃዱ ናቸው። ፕራይመሮች በተጠቃሚው የተነደፉ ስለሆኑ የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል ሊኖራቸው ይችላል። ከአብነት ዲ ኤን ኤው ማሟያ መሠረቶች ጋር ለማዛመድ የተዋሃዱ ናቸው። ስለዚህ, ማንኛውም የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል ሊኖረው ይችላል. ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ያለ ቅድመ-ነባራዊ የዲ ኤን ኤ ቁራጭ አዲስ ዲኤንኤ መፍጠር ስለማይችል ፕሪመርሮች ለዲኤንኤ መባዛት በጣም አስፈላጊ ናቸው። ለ PCR ፕሪመርን ሲነድፍ የሚከተሉትን ነገሮች ግምት ውስጥ ማስገባት ያስፈልጋል፡
- ፕሪመሮች ማጉላት የሚፈልገውን ከዲኤንኤው ጎን ለጎን የሚገኙትን ተጨማሪ ኑክሊዮታይዶችን መያዝ አለባቸው።
- ዋናዎች በ55 - 65 መካከል የመቅለጥ ሙቀት ሊኖራቸው ይገባል 0C
- G እና C ይዘት ከ50 እስከ 60% መካከል መሆን አለበት።
በ PCR ውስጥ ሁለቱንም የናሙና ዲኤንኤ ክሮች ለመድገም ሁለት ፕሪመር ወደፊት እና ወደ ኋላ ጥቅም ላይ ይውላሉ። ፕሪመርስ በተለምዶ PCR እና ዲኤንኤ ቅደም ተከተል ለማከናወን ጥቅም ላይ ይውላል።
ሥዕል 02፡ በ PCR ውስጥ የመጀመሪያ ደረጃ ማቃለል
በፕሮቤ እና ፕሪመር መካከል ያለው ልዩነት ምንድነው?
Probe vs Primer |
|
| Probe በሞለኪውላር ማዳቀል በናሙና ውስጥ የታለመውን ቅደም ተከተል መኖሩን ለመለየት የሚያገለግል ትንሽ የDNA/RNA ቁርጥራጭ ነው። | ፕሪመር ትንሽ የዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ሲሆን ለዲኤንኤ መባዛት እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። |
| ተግባር | |
| ይህ በዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ናሙና ውስጥ የተወሰነ ቅደም ተከተል መኖሩን ያሳያል። | ይህ ለዲኤንኤ ውህደት እንደ መነሻ ሆኖ ያገለግላል። |
| ርዝመት | |
| ርዝመቱ ከ100 – 1000 መሠረቶች ክልል ውስጥ ሊሆን ይችላል | ርዝመቱ በአጠቃላይ ወደ 18 - 20 መሰረቶች ነው |
| ከተጨማሪ ቅደም ተከተል ጋር ማያያዝ | |
| ፕሮብ ከዒላማው ተከታታይ ማሟያ መሰረት ጋር ያዳቅላል | ፕሪመር አኒልስ ከዲ ኤን ኤ ክሮች ማሟያ መሰረት ጋር። |
| መሰየሚያ | |
| መመርመሪያዎች በቀላሉ ለማግኘት ምልክት ተደርጎባቸዋል | ዋናዎች በአጠቃላይ አልተሰየሙም |
| በ PCR ይጠቀሙ | |
| መመርመሪያዎች በ PCR ውስጥ ጥቅም ላይ አይውሉም | ፕሪመሮች በ PCR ጥቅም ላይ ይውላሉ |
ማጠቃለያ - Probe vs Primer
ፕሮብ በናሙና ውስጥ የታለመውን ቅደም ተከተል ለማወቅ ከተጨማሪ ኑክሊዮታይድ ጋር ሊዋሃድ የሚችል ትንሽ የዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ነው። የዒላማ ቅደም ተከተል መኖሩን ለማየት መመርመሪያዎች በሬዲዮአክቲቭ፣ በክትባት ወይም በፍሎረሰንትነት ምልክት ተሰጥቷቸዋል። ፕሪመር በብልቃጥ ዲኤንኤ ማጉላት እንደ መነሻ ሆኖ የሚያገለግል በጣም ትንሽ የዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ቁራጭ ነው። ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ የ3' OH ቡድን ፕሪመርን ይለያል እና ከአብነት ጋር ተጨማሪ የሆነ አዲስ ፈትል መገንባትን ይጀምራል። መመርመሪያዎች እና ፕሪመርሮች በተመሳሳይ መልኩ ከተጨማሪ ኑክሊዮታይድ ጋር በማዳቀል ይሰራሉ።ስለዚህ በምርምር እና በፕሪመር መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት ዋና ተግባራቸው ነው።
