ቁልፍ ልዩነት – RT PCR vs QPCR
Polymerase Chain Reaction የተወሰነ የዲ ኤን ኤ በብልቃጥ ውስጥ ለማጉላት የሚያገለግል ዘዴ ነው። ይህንን ዘዴ በካሪ ሙሊስ በ1983 በመፈልሰፉ ምክንያት ሳይንቲስቶች ከሺህ እስከ ሚሊዮኖች የሚቆጠሩ የተወሰኑ የዲኤንኤ ቁርጥራጮችን ለምርምር ዓላማ መስራት ችለዋል። በአሁኑ ጊዜ በክሊኒካዊ እና የምርምር ላቦራቶሪዎች ውስጥ ለብዙ አይነት አፕሊኬሽኖች የተለመደ እና በመደበኛነት የሚሰራ ቴክኒክ ሆኗል። እንደ RT PCR፣ Nsted PCR፣ multiplex PCR፣ Q PCR፣ RT-QPCR፣ ወዘተ ያሉ የባህላዊ PCR ቴክኒኮች ልዩነቶች አሉ። RT PCR እና Q PCR ሁለት አስፈላጊ የ PCR ልዩነቶች ናቸው። በ RT PCR እና Q PCR መካከል ያለው ቁልፍ ልዩነት RT PCR ተጨማሪ ዲ ኤን ኤ (ሲዲኤንኤ) ቅጂዎችን ከአር ኤን ኤ በመፍጠር የጂን አገላለጽ ለመለየት ጥቅም ላይ የሚውል ሲሆን Q PCR ደግሞ የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎችን በመጠቀም የ PCR ምርቶችን በቁጥር ለመለካት ጥቅም ላይ ይውላል።
RT PCR ምንድነው?
Reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) የአር ኤን ኤ አገላለፅን ለመለየት የሚያገለግል የ PCR ልዩነት ነው። በቲሹዎች ውስጥ የ mRNA መግለጫን ለመለየት በጣም አስፈላጊ ዘዴ ነው. የናሙናው መነሻ ቁሳቁስ አር ኤን ኤ ሲሆን RT PCR ጥቅም ላይ ይውላል። በRT PCR፣ አብነት mRNA መጀመሪያ ወደ ተጨማሪ ዲ ኤን ኤ ይቀየራል። ይህ እርምጃ በ ኢንዛይም ሪቨርስ ትራንስክሪፕትሴስ ተዳክሟል እና ሂደቱ በግልባጭ ግልባጭ በመባል ይታወቃል። በሁለተኛ ደረጃ፣ ባህላዊ PCR ለአዲስ ለተሰራው ሲዲኤን ለማጉላት ተቀጥሯል።
RT PCR በጣም ሚስጥራዊነት ያለው ዘዴ ሲሆን በአንጻራዊ ሁኔታ አነስተኛ መጠን ያለው አር ኤን ኤ ናሙና ያስፈልገዋል። RT PCR በተለምዶ አር ኤን ኤ ዝርያዎችን ለመመርመር እና ለመለካት ጥቅም ላይ ይውላል, በተለይም አር ኤን ኤ ቫይረሶች እንደ የሰው ልጅ የበሽታ መከላከያ ቫይረስ እና ሄፓታይተስ ሲ ቫይረስ.
ምስል 01፡ የRT PCR ቴክኒክ
QPCR ምንድን ነው?
Quantitative PCR (QPCR) የ PCR ምርቶችን በቁጥር ለመለካት የሚያገለግል የ PCR ልዩነት ነው። የእውነተኛ ጊዜ PCR ማሽንን በመጠቀም የእውነተኛ ጊዜ ማጉላትን ስለሚለካ የእውነተኛ ጊዜ የ polymerase chain reaction ተብሎም ይጠራል። በናሙና ውስጥ ያለውን የዒላማ ቅደም ተከተል ወይም የጂን መጠን ለመወሰን ተስማሚ ዘዴ ነው. የQPCR አስደሳች ባህሪ ሁለቱንም ማጉላት እና እውነተኛ መጠንን ወደ አንድ ደረጃ በማጣመር ነው። ስለዚህ, በማወቂያው ውስጥ የጄል ኤሌክትሮፊዮሬሲስ አስፈላጊነት በ QPCR ቴክኒክ ሊወገድ ይችላል. QPCR በ PCR ምላሾች ወቅት PCR ምርቶችን ለመሰየም የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎችን ይጠቀማል ይህም በመጨረሻ ወደ ቀጥተኛ መጠን ይመራዋል. የ PCR ምርቶች በሚከማቹበት ጊዜ የፍሎረሰንት ምልክቶችም ይከማቻሉ እና በእውነተኛ ጊዜ ማሽን ይለካሉ. QPCR ከ RT PCR ጋር ሊጣመር ይችላል. እሱም RT-QPCR ወይም QRT- PCR በመባል ይታወቃል እና በሴሎች ወይም ቲሹዎች ውስጥ ያሉ የአር ኤን ኤ ደረጃዎችን ለመለየት በጣም ኃይለኛ፣ ሚስጥራዊነት ያለው እና መጠናዊ ዘዴ ተደርጎ ይወሰዳል።
SYBR አረንጓዴ እና ታቅማን የእውነተኛ ጊዜ PCR የማጉላት ሂደትን ለመለየት ወይም ለመመልከት የሚጠቅሙ ሁለት ዘዴዎች ናቸው። የ SYBR አረንጓዴ ዘዴ የሚከናወነው SYBR አረንጓዴ በሚባለው የፍሎረሰንት ቀለም በመጠቀም ሲሆን ማጉሊያውን በማያያዝ ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ ለማምረት ያስችላል። ታቅማን የሚካሄደው ባለሁለት ምልክት የተደረገባቸው መመርመሪያዎችን በመጠቀም ሲሆን ማጉሊያውን በ Taq polymerase በማበላሸት እና በስእል 02 ላይ እንደሚታየው ፍሎሮፎርን ይለቀቃል. ሁለቱም ዘዴዎች የማጉላት ሂደቱን ሂደት ይቆጣጠራሉ እና የምርቱን መጠን በእውነተኛ ጊዜ ሪፖርት ያደርጋሉ..
እውነተኛ ጊዜ PCR እንደ የጂን አገላለጽ መጠን፣ ማይክሮ አር ኤን ኤ እና ኮዲዲንግ ያልሆነ አር ኤን ኤ ትንታኔ፣ SNP ጂኖታይፒንግ፣ የቅጂ ቁጥር ልዩነቶችን መለየት፣ ብርቅዬ ሚውቴሽንን መለየት፣ በዘረመል የተሻሻሉ ህዋሳትን መለየት፣ ተላላፊ ወኪሎችን ማግኘት የመሳሰሉ የተለያዩ አፕሊኬሽኖች አሉት። ፣ ወዘተ
ምስል 02፡ መጠናዊ PCR ቴክኒክ
በRT PCR እና QPCR መካከል ያለው ልዩነት ምንድነው?
RT PCR vs QPCR |
|
| RT PCR የጂን አገላለፅን በማጉላት ለመለየት የሚያገለግል ዘዴ ነው። | QPCR ዲኤንኤን የሚያሳድግ እና PCR ምርቶችን በቅጽበት የሚለካ ዘዴ ነው። |
| የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴስ ኢንዛይም ተሳትፎ | |
| የኢንዛይም ሪቨርስ ትራንስክሪፕትሴዝ ለRT PCR ጥቅም ላይ ይውላል። | የኢንዛይም ሪቨርስ ትራንስክሪፕትሴዝ ለQPCR ጥቅም ላይ አይውልም። |
| Fluorescently ምልክት የተደረገባቸው ሞለኪውሎች አጠቃቀም | |
| Fluorescently ምልክት የተደረገባቸው ማቅለሚያዎች ወይም መመርመሪያዎች ለRT PCR ጥቅም ላይ አይውሉም። | Fluorescently ምልክት የተደረገባቸው ማቅለሚያዎች ወይም መመርመሪያዎች ለQPCR ጥቅም ላይ ይውላሉ። |
| የ PCR ምርት መጠን | |
| ከQPCR ጋር ካልተጣመረ በስተቀር RT PCR የ PCR ምርትን አይለካም። | QPCR በቁጥር PCR ምርቱን ይለኩ። |
| የመነሻ ቁሳቁስ | |
| የመነሻ ቁሳቁስ mRNA ነው። | የመነሻ ቁሳቁስ ዲኤንኤ ነው። |
| የሲዲኤንኤ ውህደት | |
| ተጨማሪ ዲኤንኤ የሚመረተው በRT PCR ጊዜ ነው። | ተጨማሪ ዲኤንኤ በQPCR ጊዜ አይፈጠርም። |
ማጠቃለያ - RT PCR vs QPCR
RT PCR እና QPCR ሁለት የባህላዊ PCR ስሪቶች ናቸው። የ RT PCR ቴክኒክ ለኤምአርኤንኤ ናሙናዎች የሚሰራ ሲሆን በተገላቢጦሽ ወደ ግልባጭ እና ሲዲኤን በማምረት የሚመራ ነው።QPCR የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎችን ወይም ምልክት የተደረገባቸውን መመርመሪያዎችን በመጠቀም በእውነተኛ ጊዜ PCR የሙቀት ዑደቶች የ PCR ምርቶችን ለመለካት ይጠቅማል። በQPCR ውስጥ የ PCR ምርት መጠን በናሙናው በሚወጡት የፍሎረሰንት ምልክቶች ይወከላል። RT PCR እንደ ማጉላት ሂደት በብዛት ጥቅም ላይ የሚውል ሲሆን QPCR በተለምዶ እንደ የቁጥር ሂደት ነው። ይህ በRT PCR እና QPCR መካከል ያለው ልዩነት ነው።
